[發明專利]一種基于GS篩選系統的動物細胞高效表達載體及應用有效
| 申請號： | 201410037976.6 | 申請日： | 2014-01-26 |
| 公開（公告）號： | CN104805107B | 公開（公告）日： | 2018-03-23 |
| 發明（設計）人： | 邵勇;胡顯文;高招剛;高麗華;潘蕓;王友亮;劉羽;李伊培 | 申請（專利權）人： | 中國人民解放軍軍事醫學科學院生物工程研究所 |
| 主分類號： | C12N15/65 | 分類號： | C12N15/65;C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司11245 | 代理人： | 關暢 |
| 地址： | 100071 北京市豐臺*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 gs 篩選 系統 動物 細胞 高效 表達 載體 應用 | ||
1.一種構建表達載體的方法，包括如下步驟：將出發載體pIRES2-EGFP-B的驅動目的基因表達的CMV啟動子替換為hCMV啟動子，且在所述出發載體pIRES2-EGFP-B中插入標記基因，得到表達載體；
所述標記基因為GS標記基因；
所述GS標記基因的核苷酸序列為序列表中的序列3自5’末端第12-1797位核苷酸；
所述hCMV啟動子的核苷酸序列為序列表中的序列3自5’末端第1806-3953位核苷酸；
所述出發載體pIRES2-EGFP-B按照包括如下步驟的方法制備：將載體pIRES2-EGFP進行BamHⅠ單酶切后再補平粘性末端得到出發載體pIRES2-EGFP-B；
所述出發載體pIRES2-EGFP-B的核苷酸序列具體為序列表中序列4。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步驟：將所述標記基因插入所述出發載體pIRES2-EGFP-B的多克隆位點后，得到中間載體，再將所述中間載體的驅動目的基因表達的CMV啟動子替換為hCMV啟動子，得到表達載體。
3.由權利要求1或2所述的方法制備的表達載體。
4.根據權利要求3所述的表達載體，其特征在于：所述表達載體的核苷酸序列為序列表中的序列3。
5.權利要求3或4所述的表達載體在提高目的蛋白表達中的應用。
6.權利要求3或4所述的表達載體在篩選高效表達目的蛋白的細胞株中的應用。
7.根據權利要求5或6所述的應用，其特征在于：所述目的蛋白的編碼基因為序列表中的序列1或序列2所示的核苷酸。
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