[發明專利]一株海洋殼青霉、其衍生的喹啉酮類化合物及其制備和應用

有效

• 申請號: 201410036251.5
• 申請日: 2014-01-24
• 公開（公告）號: CN103937678A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 張翼;穆軍;馮妍;斯蒂芬妮·格弘德;韓金媛;溫利雪;鮑海燕
• 申請（專利權）人: 大連交通大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C07D215/22;C12P17/12;A61K31/4704;A01N43/42;A61P35/00;A01P7/00;C12R1/80
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 賈漢生;李馨

1.一株海洋真菌殼青霉（Penicillium?crustosum）AP2T1，其保藏編號為CGMCC?No.8516。

2.喹啉酮類化合物，其特征在于：由所述的海洋真菌殼青霉（Penicillium?crustosum）AP2T1CGMCC?No.8516衍生，所述喹啉酮類化合物的結構式為：

3.如權利要求2所述的喹啉酮類化合物的制備方法，其特征在于包括如下操作步驟：

Ⅰ.發酵

從殼青霉（Penicillium?crustosum）CGMCC?No.8516發酵產物中提取、分離純化viridicatol；

Ⅱ.甲基化

a.將步驟Ⅰ獲得的viridicatol干燥后加入密閉反應容器，在氬氣或干燥氮氣保護下，按照每0.1g?viridicatol加入0.5～1.5mL無水二甲基甲酰胺的比例添加，室溫下磁力攪拌8～20min；

b.攪拌狀態下，向步驟a產物中分三次，每次間隔15～25min，逐滴加入三甲基硅重氮甲烷的2.0M二乙醚溶液，其每次加入的體積與步驟a中viridicatol的質量比為0.2～0.3mL：0.1～0.15mL：0.1～0.15mL：0.1g；

c.繼續攪拌2～4小時，TLC監測反應進程；

d.真空抽干溶劑以終止反應；

e.按照每0.1g?viridicatol加入0.1～0.5mL水的比例加水，真空抽干；

f.分離純化得到化合物R1-R6；

或者，化合物R6從步驟Ⅰ獲得的發酵產物中，經過柱層析得到；

所述化合物R1-R6在薄層層析板上，于254nm紫外線照射下均呈單個的深紫色斑點，在365nm紫外線照射下均呈單個的紫色熒光斑點，硫酸茴香醛顯色均為淺橙色；其高效液相色譜-質譜聯用分析的保留時間及分子量依次為15.2min、M=295；12.7min、M=295；12.7min、M=281；11.2min、M=281；10.2min、M=281；9.0min、M=267；

所述的檢測用高效液相色譜分析條件為Nucleosil?C-18柱，填料粒徑3微米，柱尺寸2.0mm×100mm，流動相為A相：0.1%甲酸水溶液，B相：0.06%甲酸乙腈溶液，0-15min10%B線性梯度增至100%B，15-20min為100%B，流速0.4mL/min；檢測器為陣列二極管檢測器、電噴霧質譜儀。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟Ⅰ中所述的提取包括以下操作步驟：過濾發酵產物，分別收集菌絲體和發酵液，并將獲得的發酵液經乙酸乙酯萃取并濃縮，將獲得的菌絲體用有機溶劑提取并濃縮，將所得濃縮物合并，即為粗提物；

其中，所述有機溶劑為丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇中一種或幾種。

5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟Ⅰ中所述的分離純化包括以下操作步驟：

將步驟Ⅰ中所獲得的提取產物經色譜分離，得到在Si-60F254薄層層析板上Rf值為0.27、254nm紫外光下呈暗紫色、365nm紫外線下有紫色熒光的物質viridicatol，層析展開劑為體積比為9:1的氯仿-甲醇混合溶液。

6.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟Ⅰ中的發酵所用培養基組成為：每升含土豆汁500mL，天然粗海鹽配制的30～50g/L鹽水500mL，蔗糖15～25g。

7.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于：步驟Ⅰ中發酵的條件是：26～30℃培養箱靜止發酵25～35天，發酵結束時加入發酵液一半體積的乙酸乙酯。