[發明專利]一種產除莠霉素的菌株及其應用

有效

• 申請號: 201410035955.0
• 申請日: 2014-01-26
• 公開（公告）號: CN103805543A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 洪文榮;林藝輝;陳成立
• 申請（專利權）人: 福州大學;福州市鼓樓區榮德生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K35/74;A61P35/00;C12R1/55
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明涉及從自然界分離藥用微生物，具體涉及一種產除莠霉素的菌株及其應用，屬于微生物藥物領域。

背景技術

眾所周知，陸地放線菌是抗菌、抗腫瘤以及免疫抑制劑等多種藥物的重要來源。土壤放線菌產生的抗生素也已在農業上廣泛應用。安莎類抗生素為一個脂肪鏈（稱為安莎橋）連接于芳香環的兩個不相鄰原子間的一類化合物，其分子結構中的芳香環有兩種：苯環和萘環。因此，安莎類抗生素可以分為苯安莎類抗生素和萘安莎類抗生素兩種。

由吸水鏈霉菌產生的Herbimycin?A（除莠霉素A）屬于苯安莎類抗生素。它具有重要的生物學活性，不但具有廣譜的除草作用，還有抗細菌（革蘭陽性菌和革蘭陰性菌）、抗霉、抗酵母和抗原蟲等活性，是一種新型的強效免疫抑制劑。免疫抑制劑的主要功能是異源器官移植抗排斥反應和人自身免疫性疾病治療，因此，Herbimycin?A在器官移植的抗排異反應中，將可能得到廣泛應用。此外，Herbimycin?A具有很好的抗腫瘤增殖的作用，具有極其重要的開發和研究價值，應用前景廣闊。

發明內容

本發明的目的在于提供一種產除莠霉素的菌株及其應用。是從自然界尋找藥用微生物，其中一株來源于土壤的放線菌SH035，其發酵代謝產物，含生理活性物質，經提取純化，確定其化學結構。

一種產除莠霉素的菌株，所述菌株為吸水鏈霉菌（Streptomyces?hygroscopicus）SH035，已于2013年12月6日在中國普通微生物菌種保藏管理中心登記保蕆，保藏編號為CGMCC?No.8544。

所述菌株的代謝產物經HPLC、質譜和核磁共振技術確定，該代謝產物為除莠霉素，與除莠霉素A同質。

所述菌株在抗腫瘤及抗生素藥物方面的應用。

具體方法為：

1、該放線菌SH035篩選自福建莆田市坪洋村雞角髻山上采集的土壤中，經分離獲得具有抗細菌、真菌和腫瘤細胞活性的放線菌菌株，命名為吸水鏈霉菌（Streptomyces?hygroscopicus）SH035，于2013年12月6日在中國普通微生物菌種保藏管理中心登記保蕆，保藏編號為CGMCC?No.8544。

2、根據菌株的菌落形態特征（圖1）、培養特征、生理生化特征和16SrDNA?序列比對分析及其進化樹構建（圖2），確定該菌株為吸水鏈霉菌，命名為吸水鏈霉菌SH035。

3、吸水鏈霉菌SH035代謝產物結構確定。其發酵上清液中的活性成分，經有機溶劑萃取，濃縮，精制，高效液相色譜（HPLC），質譜（MS）和核磁共振波譜檢測分析，確定該活性成分為Herbimycin?A，與除莠霉素同質。

4、該出發菌株的除莠霉素發酵單位可達1500μg/mL以上，發酵條件經簡單優化后，高達5000μg/mL以上，滿足產業化要求。

5、發酵主要培養基組成：葡萄糖1.5%，淀粉3.0%，黃豆餅粉3.5%，玉米粉2.0%，MgSO4?0.5%，CaCO3?0.2%，淀粉酶0.01%，pH?7.2。

6、代謝產物提取精制。發酵液經酸化，過濾，去除固體物，得到濾液，經溶媒萃取，濃縮，蒸干，洗滌，得到干品，即為Herbimycin?A。提取方便，組分單一，產品質量好，收率可達70%以上，含量可達98%以上。

本發明的優點在于：本申請的吸水鏈霉菌SH035，其生物合成Henbimycin?A的發酵單位可達1500μg/mL以上，發酵條件經簡單優化后，高達5000μg/mL以上，滿足產業化要求。本發明提供的代謝產物Herbimycin?A，提取方便，組分單一，產品質量好，收率可達70%以上，含量可達98%以上，這些優勢未見報道。

附圖說明

圖1?吸水鏈霉菌SH035的菌絲形態（a）和菌落形態（b），光鏡（×1000）。

圖2吸水鏈霉菌SH035的系統發育進化樹。

圖3?Herbimycin?A的結構示意圖。

圖4?Herbimycin?A的HPLC分析圖。

圖5?Herbimycin?A的質譜圖。

具體實施方式

實施例1：菌株SH035的篩選分離

從福建莆田市坪洋村雞角髻山上采集的土壤分離獲得多個菌株，經過初篩和復篩后得到具有抑菌活性的放線菌，其中一株編號為放線菌SH035。

實施例2：放線菌SH035菌株的鑒定