[發(fā)明專利]用于臨床手術(shù)創(chuàng)傷的快速止血產(chǎn)品及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410035723.5
• 申請(qǐng)日: 2014-01-24
• 公開（公告）號(hào): CN103820412A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 易正芳;叢曉楠;呂方;裴正培;金明飛;劉明耀
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華東師范大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/10
• 分類號(hào): C12N9/10;C12N15/54;A61L15/38;A61L15/44
• 代理公司: 上海麥其知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31257
• 代理人: 董紅曼

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于用于臨床手術(shù)創(chuàng)傷的快速止血產(chǎn)產(chǎn)品的領(lǐng)域，具體涉及一種含有微生物谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶(mTG)的止血組合物及其制備方法和應(yīng)用。?

背景技術(shù)

控制出血(或流血)是急救和創(chuàng)傷治療的重要步驟。在手術(shù)過程中，因流血過多而引起死亡的醫(yī)療事故時(shí)有發(fā)生。一般而言，在臨床手術(shù)中，經(jīng)常因切割組織或血管等而需要止血。常見的止血方式主要有物理止血和藥物止血。其中物理止血主要通過機(jī)械外力來鉗夾、結(jié)扎、縫合以及壓迫血管來止血，而藥物止血主要通過快速止血?jiǎng)┻M(jìn)行止血。?

在臨床上，快速止血?jiǎng)┲饕譃槿N：?

1、人工合成制劑。該類產(chǎn)品能快速形成聚合物，從而迅速地與相鄰表面黏連。但是，在降解過程中易形成有毒物質(zhì)(氰和甲醛)引起炎癥反應(yīng)，推遲傷口愈合，不能用于咬傷、刺傷或擠壓傷，而且7天內(nèi)不要清洗創(chuàng)傷區(qū)域，要求操作迅速，易造成二次出血，使用時(shí)局部疼痛。同時(shí)，該類產(chǎn)品質(zhì)感很硬，易損傷傷口周圍組織，造成二次損傷，發(fā)熱，引起灼燒，吸收十分緩慢，時(shí)間長達(dá)幾年。?

2、可吸收制劑，包括明膠海綿、氧化再生纖維素、微原纖維膠原。該類產(chǎn)品的效果如下：?

表1?

由表1可知，可吸收制劑類止血產(chǎn)品，盡管其具有易被吸收的優(yōu)點(diǎn)，但其不能主動(dòng)激活凝血機(jī)制，其止血速度慢，傷口易黏連，容易引起術(shù)后疼痛或麻木。?

3、生物制劑，包括外用凝血酶、纖維蛋白粘合劑。其中外用凝血酶類產(chǎn)品效果如下：?

表2?

由表2可知，外源性凝血酶最大問題在于具有免疫原性，會(huì)引起過敏反應(yīng)，嚴(yán)重者甚至傳播疾病(如瘋牛病、艾滋病)等風(fēng)險(xiǎn)。另外，由于該類產(chǎn)品具有和人源凝血酶相同的凝血機(jī)制，因此對(duì)于先天性血栓性物質(zhì)或先天性血栓傾向的病人，臨床上使用容易產(chǎn)生形成血栓，引起血管閉塞，嚴(yán)重者導(dǎo)致心肌梗死，腦血栓形成，深靜脈血栓形成，腦栓塞，肺栓塞等，極大地制約了其在臨床上的使用。?

由此可見，理想的手術(shù)止血類產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)具有以下標(biāo)準(zhǔn)：?

1、止血效果確切；?

2、組織反應(yīng)輕；?

3、無抗原性；?

4、體內(nèi)充分降解吸收；?

5、使用方便；?

6、價(jià)格適中；?

7、不影響愈合，不易產(chǎn)生粘連。?

然而，近年來全球仍沒有出現(xiàn)達(dá)到上述所有標(biāo)準(zhǔn)的止血材料，并且現(xiàn)有的目前手術(shù)止血產(chǎn)品存在止血效果欠佳、價(jià)格昂貴等副作用，無法滿足上述標(biāo)準(zhǔn)。綜上所述，目前臨床手術(shù)創(chuàng)傷類的快速止血產(chǎn)品或止血?jiǎng)鋺?yīng)當(dāng)至少具有以下共性，即：止血快速、傷口不黏連，易愈合、成本低廉、易被體內(nèi)吸收、不易傳播疾病和后遺癥少等。然而，目前尚沒有達(dá)到或接近達(dá)到上述標(biāo)準(zhǔn)的止血?jiǎng)?

谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶(蛋白質(zhì)-谷氨酸-γ-谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶，Transglutaminase，簡稱TGase)，又稱轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶或γ-谷氨酰胺酰基轉(zhuǎn)移酶，由331個(gè)氨基組成，催化酰基轉(zhuǎn)移反應(yīng)，能催化蛋白質(zhì)分子內(nèi)或分子間的交聯(lián)、蛋白質(zhì)和氨基酸之間的連接以及蛋白質(zhì)分子內(nèi)谷氨酰胺基的水?解，從而改善蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能特性。由于其卓越的交聯(lián)特性，被譽(yù)為“21世紀(jì)超級(jí)粘合劑”。在食品、醫(yī)藥、紡織、化妝品等領(lǐng)域展現(xiàn)出廣泛前景(崔艷華等，《生物技術(shù)通報(bào)》，2009年第一期)?

TGase廣泛存在于動(dòng)、植物和微生物機(jī)體組織。最近的研究發(fā)現(xiàn)，不同來源的TGase在氨基酸序列、分子量大小、酶的理化性質(zhì)具有差異。動(dòng)物來源的TGase分子量不等，需要鈣離子激活，酶活性中心為半胱氨酸殘基位點(diǎn)。動(dòng)物來源的TGase以豚鼠肝臟的TGase(GTG)研究最為深入，該酶的分子量為90kD，其酶促反應(yīng)需要鈣離子激活。對(duì)底物特異性強(qiáng)，同時(shí)由于該酶含有17個(gè)半胱氨酸殘基致使其熱穩(wěn)定性差。在50℃下，10分鐘后，酶活性僅為殘留40％。鈣離子對(duì)植物來源的TGase活性影響因物種而異。從動(dòng)物組織中提取的TGase來源少，成本高，分離程序復(fù)雜，不易推廣應(yīng)用。?

TGase在植物組織中扮演何種角色仍不十分清楚，Kang等從大豆葉片中提取TGase進(jìn)行了研究。但是分離純化工藝復(fù)雜，酶的得率較低。目前，尚未有植物來源TGase用于商業(yè)化生產(chǎn)。?