[發明專利]中華大蟾蜍抗菌肽BG-CATH6(29)及其編碼基因和應用

有效

• 申請號: 201410035530.X
• 申請日: 2014-01-24
• 公開（公告）號: CN103788192A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 孫同毅;李文輝
• 申請（專利權）人: 濰坊醫學院
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46;C12N15/12;A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 劉曉春

技術領域

本發明屬于生物醫學領域，具體涉及中華大蟾蜍抗菌肽BG-CATH6(29)及其編碼基因和應用。

背景技術

中華大蟾蜍為無尾兩棲類蟾蜍屬動物，廣泛分布于我國大部分地區，是傳統中藥蟾酥和蟾皮的主要基源動物，有具有解毒散結、消積利水、殺蟲消疳的功效。從中華大蟾蜍Bufo?bufo?gargarizans?Cantor的干燥皮提取精制而成的水溶性制劑-華蟾素，目前廣泛應用于多種中晚期腫瘤，如原發性肝癌、胃癌、肺癌、結腸癌、胰腺癌等。

抗菌肽（Cathelicidin）是主要在哺乳動物體內發現的一類結構多變的抗微生物肽，因在表達的信號肽與成熟肽間含有一高度保守的cathelin肽段而自成一家族，成熟抗菌肽位于前體分子的C-末端，具有很高的變異性。Cathelicidin和防御素一樣，也是宿主免疫防御系統的重要組成部分，具有廣譜的抗微生物活性、結合內毒素、抗腫瘤、免疫調節、參與傷口的愈合和血管的發生等多種功能。

發明內容

本發明的目的是提供了一種中華大蟾蜍抗菌肽BG-CATH6(29)及其編碼基因和應用。中華大蟾蜍的cathelicidin抗菌肽BG-CATH6(29)具有顯著的抑制腫瘤細胞的作用，且具有結構簡單、人工合成方便、抗菌譜系廣的有益特點。可以應用于抗腫瘤細胞制劑的制備，用于人和動物的治療。

為了實現本發明的目的，本發明提供了如下技術方案：

中華大蟾蜍抗菌肽BG-CATH6(29)，其具有SEQ?ID?NO:3所示的氨基酸序列。

所述抗菌肽BG-CATH6(29)含有一對二硫鍵，由Cys13與Cys19形成。

含有所述的中華大蟾蜍抗菌肽BG-CATH6(29)的蛋白前體，其具有SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列。

所述的中華大蟾蜍抗菌肽BG-CATH6(29)的蛋白前體的編碼基因，其具有SEQ?ID?NO:1所示的核苷酸序列。

使用T7啟動子序列和SP6啟動子序列篩選獲得所述編碼基因，

所述T7啟動子序列為5’-TAATACGACTCTATAGGGA-3’；

所述SP6啟動子序列5’-CATACGATTTAGGTGACACTATAG-3’。

本發明還提供了所述的中華大蟾蜍抗菌肽BG-CATH6(29)在制備用于抗腫瘤的藥物中的應用。

所述抗菌肽BG-CATH6(29)在100μg/ml時，對肝癌腫瘤細胞的抑制效果顯著。

所述抗菌肽BG-CATH6(29)在3.125μg/ml時，對乳腺癌細的抑制效果顯著。

所述抗菌肽BG-CATH6(29)在3.125μg/ml時，對腦神經瘤細胞的抑制效果顯著。

與現有技術相比，本發明的優點和技術效果是：本發明在中華大蟾蜍毒液腺cDNA文庫中獲得了cathelicidin抗菌肽BG-CATH6(29)。其信號肽及cathelin肽段與其它cathelicidin家族的成員高度保守，而其成熟肽高度變異。中華大蟾蜍cathelicidin抗菌肽顯示了廣譜的抑制腫瘤細胞活性。將本發明的中華大蟾蜍的cathelicidin抗菌肽BG-CATH6(29)全序列氨基酸序列經蛋白質數據庫進行搜尋比較，未發現有任何相同cathelicidin家族成熟肽。

因此，爬行動物來源的中華大蟾蜍cathelicidin家族抗菌肽及其衍生物具有顯著的抑制腫瘤細胞生長的作用，且應用范圍廣泛。該抗菌肽具有結構簡單、人工合成方便、抗菌譜系廣的有益特點，可以應用于抗微生物感染和抗腫瘤的藥物的制備，用于人和動物的治療。具有良好的市場應用前景。

附圖說明

圖1是本發明中華大蟾蜍cathelicidin家族抗菌肽BG-CATH6(29)的cDNA及其蛋白質序列，其中斜體加框序列為推導的中華大蟾蜍cathelicidin家族抗菌肽BG-CATH6(29)的成熟序列。

圖2表明本發明抗菌肽BG-CATH6(29)對肝癌細胞HepG2作用。

圖3表明本發明抗菌肽BG-CATH6(29)對乳腺癌細胞MCF-7作用。

圖4表明本發明抗菌肽BG-CATH6(29)對腦神經瘤細胞Neuro-2a作用。

具體實施方式

下面結合附圖和具體實施例對本發明的技術方案做進一步詳細的說明。

實施例1、中華大蟾蜍抗菌肽BG-CATH6(29)的基因克隆

1、總RNA的提取