[發明專利]一種人尿中檢測香草扁桃酸的方法

無效

• 申請號: 201410034795.8
• 申請日: 2014-01-23
• 公開（公告）號: CN104807923A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發明（設計）人: 劉軍;陳齊;謝丹
• 申請（專利權）人: 杭州紐貝生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種人尿中檢測香草扁桃酸的方法，其步驟包括：

1)取人尿液用HCl酸化，在-80℃條件下保存，尿液融化后用乙酸乙酯萃取、揮發，醋酸再溶解，可獲得VMA粗提取物；

2)上述粗提取物經過HPLC分離，在UV檢測器280nm波長下，獲得穩定單一的VMA吸收峰，并通過外標法繪制VMA標準曲線，最終計算出VMA的含量。

2.根據權利要求1所述的人尿中檢測香草扁桃酸的方法，其特征是：步驟1)具體如下：

a)收取新鮮尿液后，加入5M?HCl酸化，放入-80℃冷柜中保存，直到開始后續實驗；

b)待尿液融化后，取4ml尿液到一個預裝有2g?NaCl的15ml離心管內，上下顛倒混合10min形成飽和鹽溶液；

c)加入4ml乙酸乙酯，上下顛倒混合5min；4000g離心5min，小心吸取上層有機相到一根新50ml圓底離心管內；

d)重復b-c步2次，獲得上層有機相共12ml；

e)將離心管用金屬加熱器加熱到45℃，在通風柜內高風揮發，直到所有的乙酸乙酯揮發完全，獲得黃色或黑色沉淀；

f)加入400μl1％醋酸溶液，充分震蕩，4℃過夜溶解；

g)15000g離心后，將上清液移到新1.5ml離心管內，4℃保存不超過1周，等待HPLC檢測。

3.根據權利要求1所述的人尿中檢測香草扁桃酸的方法，其特征是：HPLC條件為：

柱子：SP-C18(4.6mm*250mm，5um)；

流動相：A(水∶醋酸=98∶1)：B(水∶甲醇∶醋酸=68∶30∶2)梯度洗脫；

洗脫梯度：0-15min：100％A-20％A

15-20min：20％A

20-21min：20％A-100％A

21-35min：100％A

流速：0.8ml／min；

檢測波長：UV280nm；

上樣量：100μl。

4.根據權利要求1所述的人尿中檢測香草扁桃酸的方法，其特征是：外標法繪制VMA標準曲線步驟如下：用電子分析天平稱取VMA，用1％的醋酸配置成1ng／μl、2.5ng/μl、5ng/μl、10ng/μl、20ng／μl、100ng/μl的濃度梯度的VMA溶液，將這些濃度梯度的VMA溶液先后上HPLC柱檢測，并根據其檢測結果繪制標準曲線。