[發(fā)明專利]與小麥千粒重相關(guān)的基因、功能標(biāo)記及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410033076.4
• 申請日: 2014-01-24
• 公開（公告）號: CN103820476A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李斯深;張照貴;趙巖;孔凡美;郭營
• 申請（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 石家莊國域?qū)＠虡?biāo)事務(wù)所有限公司 13112
• 代理人: 白海靜

1.與小麥千粒重相關(guān)的基因TaSnRK2.10，其特征在于，該基因包括TaSnRK2.10-4A、TaSnRK2.10-4B和TaSnRK2.10-4D；其中所述TaSnRK2.10-4A的cDNA核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示、gDNA核苷酸序列如SEQ?ID?NO：4所示，所述TaSnRK2.10-4B的cDNA核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示、gDNA核苷酸序列如SEQ?ID?NO：5所示，所述TaSnRK2.10-4D的cDNA核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示、gDNA核苷酸序列如SEQ?ID?NO：6所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的與小麥千粒重相關(guān)的基因TaSnRK2.10，其特征是在于，擴增TaSnRK2.10基因的引物為TaSnRK2.10-1和TaSnRK2.10-2；其中TaSnRK2.10-1的正向引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：7所示、反向引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：8所示；?TaSnRK2.10-2的正向引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：9所示、反向引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：10所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的與小麥千粒重相關(guān)的基因TaSnRK2.10，其特征在于，用于TaSnRK2.10基因染色體定位的引物為TaSnRK2.10-4A1，TaSnRK2.10-4B1和TaSnRK2.10-4D1；其中TaSnRK2.10-4A1的正向引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：11所示、反向引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：12所示，?TaSnRK2.10-4B1的正向引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：13所示、反向引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：14所示，?TaSnRK2.10-4D1的正向引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：15所示、反向引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：16所示。

4.一種與小麥千粒重相關(guān)的基因TaSnRK2.10的分子標(biāo)記，其特征在于，該分子標(biāo)記為TaSnRK2.10-4A-caps，其分子標(biāo)記的引物正向核苷酸序列如SEQ?ID?NO：11所示、反向核苷酸序列如SEQ?ID?NO：12所示。

5.一種利用分子標(biāo)記TaSnRK2.10-4A-caps檢測小麥品種千粒重的方法，其特征在于，包括以下步驟：

a．用TaSnTK2.10-4A-caps的標(biāo)記引物對小麥品種的DNA分別進行PCR擴增，其PCR擴增體系為20?μl，包含H₂O?14.3?μl，2×PCR緩沖液2.0?μl，Taq酶0.20?μl，左反向引物各0.5?μl，cDNA?1.0?μl，dNTP?1.5?μl；擴增條件為94℃預(yù)變性4?min；94℃變性40?s，58℃退火45?s，72℃延伸1?min，35個循環(huán)；72℃延伸10?min；10℃保存；

b．將上述擴增產(chǎn)物分別用SalI內(nèi)切酶進行酶切，酶切產(chǎn)物在1%瓊脂糖凝膠上電泳分離，如PCR擴增產(chǎn)物被切開大小為793?bp和316?bp的兩條帶，則該小麥品種屬于具有高千粒重純合體品種；如PCR產(chǎn)物被切開為793?bp和316?bp的帶，同時具有未切開的1106?bp大小的帶，則該小麥品種屬于具有高千粒重的單倍型的雜合體品種；如PCR擴增產(chǎn)物只有一條未切開的大小為1106?bp的帶，則該小麥品種屬于不具有高千粒重的純合體品種；其中SalI內(nèi)切酶體系為20?μl，包含SalI內(nèi)切酶1?μl，10×緩沖液2?μl，PCP產(chǎn)物17?μl；反應(yīng)條件為37℃，5?min。