[發明專利]一種用于免疫復合物緩沖解離劑的CIC抗體緩沖液解離劑

無效

• 申請號: 201410032043.8
• 申請日: 2014-01-23
• 公開（公告）號: CN103776996A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 成軍;張益明;馬炬明;陳達偉;孫長貴;戴玉柱;王國政;江曉肖
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第一一七醫院
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 浙江永鼎律師事務所 33233
• 代理人: 王梨華;陳麗霞

技術領域

本發明涉及醫學檢測領域，尤其涉及一種用于免疫復合物緩沖解離劑的CIC抗體緩沖液解離劑。

背景技術

細菌、病毒等病原體侵入機體后或致敏物質(抗原，含自身抗原)刺激機體發生免疫應答，進而產生特異性免疫效應細胞或抗體，并與抗原發生特異性結合，所得到的復合物稱為免疫復合物(又稱抗原抗體復合物，immune?complex，IC)，主要有IgG，IgM，IgA，IgE型免疫復合物，其中以IgG和IgM最常見。由于抗原與抗體比例不同，所形成的IC分子大小各異，通常有三種形式：一是抗原抗體比例適當時，形成大分子的不溶性IC(大于19S)，易被吞噬細胞捕獲、吞噬和清除。二是抗原量過剩時，形成小分子的可溶性IC(小于6.6S)，易透過腎小球濾過隨尿排出體外。三是抗原量稍過剩時，形成中等大小的可溶性IC(8.8-19S)，它既不被吞噬細胞清除，又不能通過腎小球濾過排出，可較長時間游離于血液和其他體液中，又稱循環免疫復合物(circulating?immuno?complex，CIC)。

正常情況下，機體內的游離抗原與相應抗體結合形成IC，可被機體的防御系統清除，作為清除異物抗原的一種方式，對機體有利。但在某些病理情況下，體內形成的IC不能被及時清除，可在局部沉積，通過激活補體，并在血小板、中性粒細胞等參與下，引起一系列連鎖反應而導致組織損傷，出現臨床癥狀，稱為免疫復合物病(immuno?complex?disease，ICD)。檢查組織內或循環體液中IC的存在有助于某些疾病的診斷、發病機制的研究、預后評估、病情活動觀察和療效判斷等。因此，準確、特異、靈敏檢測免疫復合物對疾病的診斷、治療和預后評估具有重要的臨床意義，CIC的檢測日益受到重視。

世界衛生組織(WHO)曾組織進行CIC檢測方法學研究，發現尚無任何一種技術同時具備特異、靈敏、批量高效、重復性好的所有特點。由于方法的復雜性、敏感性和所檢測CIC類型的局限性，目前的常用CIC檢測技術均受到免疫復合物內免疫球蛋白種類及亞類、復合物大小、抗原與抗體比例、固定補體的能力等因素影響，在臨床免疫學實驗室應用受到很大限制。

發明內容

本發明針對現有CIC檢測技術及檢測過程中，不能同時具備特異、靈敏、批量高效、重復性好、不受干擾的技術問題，公開了一種解決了以上技術問題的免疫復合物緩沖解離劑，還公開了該種免疫復合物緩沖解離劑的應用領域。

為了解決上述技術問題，本發明通過下述技術方案得以解決。

一種免疫復合物緩沖解離劑，以如下體積比例配比計，各組分及含量為，135-165μl的CIC分離劑、290-315μl的CIC洗滌劑、5-16μl的CIC復溶劑、65-76μl的CIC抗體緩沖液解離劑和65-76μl的CIC抗體緩沖液解離中和劑。以制備的HBsAg-抗-HBs免疫復合物為例，本發明的試劑配方可以使CIC中的抗體解離率達到37.5%-51.0%(抗體解離率：指CIC解離后檢測到的抗體量與實際CIC中抗體量的百分比)。而現有的CIC檢測技術因為抗體被破壞或一些干擾因素的存在，無法檢測CIC中的抗體。

其中，每1L的CIC分離劑包括以下組分：5.2g-7.7g的硼砂、4.1g-6.1g的硼酸、70g-90g的聚乙二醇、6.2g-9.2g的氯化鈉、100μl-500μl的液體生物防腐劑、余量為蒸餾水。CIC分離劑的作用如下：當每1L的CIC分離劑中包括5.2g-7.7g的硼砂、4.1g-6.1g的硼酸、70g-90g的聚乙二醇、6.2g-9.2g的氯化鈉、100μl-500μl的液體生物防腐劑、余量為蒸餾水時，被分離的CIC達到最大量，同時改用氯化鈉也可避免了傳統沉淀方法中氟化鈉殘留對后續檢測抗體的干擾。本發明采用的聚乙二醇，作為優選選用聚乙二醇6000；本發明中提到的液體生物防腐劑為Proclin-300。

每1L的CIC洗滌劑包括以下組分：5.2g-7.7g的硼砂、4.1g-6.1g的硼酸、35g-45g的聚乙二醇、8.0g-11.7g的氯化鈉、100μl-500μl的液體生物防腐劑、余量為蒸餾水。以上配方的CIC洗滌劑主要針對CIC分離劑的配方進行設計，其作用是洗去體液標本中多余的雜蛋白。本發明中提到的液體生物防腐劑為Proclin-300。