[發明專利]草烏粗提物及有效成分的制備和應用

有效

• 申請號: 201410031796.7
• 申請日: 2014-01-23
• 公開（公告）號: CN103788074A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 胡德禹;朱蕓瑩;宋寶安;薛偉;陳卓;王貞超
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: C07D403/06
• 分類號: C07D403/06;A01N43/60;A01P1/00
• 代理公司: 貴陽東圣專利商標事務有限公司 52002
• 代理人: 徐逸心;袁慶云

技術領域

本發明涉及一種草烏粗提物及從中分離得到的化合物neoechinulin?A在抗植物病毒中的應用，屬于植物保護中植物源農藥領域。

背景技術

近年來，植物病毒病的危害日益嚴重，給農業生產帶造成了巨大的經濟損失，據報道，每年僅因黃瓜花葉病毒病、煙草花葉病毒病、水稻條紋葉枯病毒和南方水稻黑條矮縮病毒病等煙草花葉病毒病造成的損失就高達1億多美元。目前對于病毒病的防治還沒有非常有效的方法，已有的防治農作物病毒病的商品藥品種少，防治效果也不夠理想。研究發現，很多天然植物中含有的化學成分具有高效、低毒的特點，從植物中尋找具有較高活性的先導化合物已成為開發植物病毒抑制劑的重要途徑之一。

草烏為毛茛科植物烏頭的干燥塊根，別名：五毒根、斷腸草、鴨頭、藥羊蒿、雞頭草、百步草。草烏的植物基源較多，包括北烏頭(Aconitum?kusnezoffii?Reichb)、烏頭(Aconitum?Carmichaeli?Debx.)、華烏頭(Aconitum?Chinense?Paxt)、黃草烏(Aconitum?Vilmorinianum?Kowar)、紫草烏(Aconitum?Delavyl?Franch)等的塊根，主要為野生品種。烏頭屬植物約有350種，主要分布于亞洲、歐洲和北美洲，我國大約有167種，大部分分布在云南北部、四川西部、西藏東部的高山地帶。根據文獻報道，草烏主要含有的化學成分為生物堿、黃酮、甾醇、揮發油等，其中以二萜生物堿居多。

2013年，黃烈軍等報道了從巖烏頭(Aconitum?recemulosum?Franch)中分離得到的13個二萜生物堿的抗煙草花葉病毒(tobacco?mosaic?virus,?TMV)活性，在濃度為30?μg/mL時，化合物racemulosine?A、sachaconitine、circinasine?A、talatisamine、8-decetylyunaconitine和14-acetytalatisamine的抗TMV活性均優于陽性對照藥劑寧南霉素，化合物racemulosine?A、sachaconitine、circinasine?A和14-acetytalatisamine的抗TMV侵染活性尤其顯著，抑制率在60%以上；化合物racemulosine?A和talatisamine對TMV增殖的抑制活性明顯比陽性對照藥好。(黃烈軍，葛永輝，劉開興，張建新，郝曉江，巖烏頭的化學成分及對煙草花葉病毒病的活性，農藥，2013,?52(4),?295-297.)這說明烏頭屬植物在抗植物病毒方面具有很大的研究發展空間。

發明內容

本發明的目的是提供草烏粗提物和化合物neoechinulin?A的制備和應用。本發明的發明人在研究中發現草烏粗提物對植物病毒病如黃瓜花葉病毒病、水稻條紋葉枯病毒和南方水稻黑條矮縮病毒病等具有較好抑制作用，通過活性跟蹤對草烏粗提物進行分離，從乙酸乙酯層分離得到對植物病毒病具有較好抑制作用的化合物neoechinulin?A。

本發明所述的草烏粗提物包括草烏總浸膏、草烏石油醚層提取物、草烏乙酸乙酯層提取物、草烏正丁醇層提取物和草烏水層提取物，其特征在于以干燥草烏(Aconitum?carmichaeli?Debx.)為原料，粉碎過篩后以濃度為70~95%的乙醇浸泡，浸泡液經減壓濃縮，回收乙醇后得到的乙醇浸膏，稱為草烏總浸膏，再將乙醇浸膏加少量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，余下水層，所得各種萃取液減壓濃縮得到相應浸膏，分別稱為草烏石油醚層提取物，草烏乙酸乙酯層提取物，草烏正丁醇層提取物，草烏水層提取物，加上草烏總浸膏，統稱草烏粗提物。取乙酸乙酯層浸膏用乙酸乙酯溶解，100~200目硅膠拌樣，200~300目硅膠裝柱，用中壓柱層析分離，以石油醚:乙酸乙酯=1:0~0:1(V:V)的洗脫液梯度洗脫，TLC點板跟蹤，收集相同極性的洗脫液，得Fr?2-1至Fr?2-6?6個組分。其中Fr?2-4用100~200目硅膠拌樣，200~300目硅膠裝柱，常壓柱層析分離，以二氯甲烷:甲醇=1:0~1:1(V:V)的洗脫液梯度洗脫，得到化合物neoechinulin?A，結構式如下：

?。

本發明草烏粗提物及有效成分的應用，在于防治農作物病害的藥物或藥劑。