[發明專利]用于納米顆粒標記免疫檢測的磁場輔助介電泳富集方法

有效

• 申請號: 201410030601.7
• 申請日: 2014-01-22
• 公開（公告）號: CN103869072A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 王萌;王潔;巴龍
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/561
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標事務所(普通合伙) 32249
• 代理人: 馮慧

1.一種用于納米顆粒標記免疫檢測的磁場輔助介電泳富集方法，其特征在于，步驟為：

第一步，在納米顆粒表面偶聯抗體或抗原分子：根據被測物的性質在PBS緩沖溶液中保持單分散的傳感納米顆粒和磁性納米顆粒表面分別偶聯相應的抗體或抗原分子，分離洗滌去除多余抗體或抗原分子；

第二步，制備傳感納米顆粒和磁性納米顆粒免疫結合聚集體：根據被測物的為抗原或是抗體，先將第一步得到磁性納米顆粒或傳感納米顆粒加入被測物溶液，然后再加入第一步得到的另外的納米顆粒反應形成傳感納米顆粒和磁性納米顆粒免疫結合聚集體混合溶液；

第三步，用介電泳富集：將第二步得到的傳感納米顆粒和磁性納米顆粒免疫結合聚集體混合溶液加入富集裝置中，使混合溶液處在恒定磁場和外加交變電場作用下，磁場梯度方向和交變電場梯度的方向相同或相反，使傳感納米顆粒和磁性納米顆粒免疫結合聚集體被富集到電極表面，抑制傳感納米顆粒在電極表面富集，通過檢測電極表面免疫檢測分子形成的兩種不同納米顆粒聚集體的數量來測量溶液中被測物含量。

2.如權利要求1所述的用于納米顆粒標記免疫檢測的磁場輔助介電泳富集方法，其特征在于，所述的磁場場強為0.2～0.5特斯拉，所述的交變電場的電壓為1千赫茲～1兆赫茲正弦波，幅值為2～20伏，作用時間為2～40分鐘。

3.如權利要求1所述的用于納米顆粒標記免疫檢測的磁場輔助介電泳富集方法，其特征在于，第一步中，當被測物是抗原時，則傳感納米顆粒或磁性納米顆粒的任一種上偶聯的抗體為單克隆抗體，第二步中另一種納米顆粒上相應偶聯的第二抗體為單克隆或多克隆抗體；第一步中當被測物是抗體時，則傳感納米顆粒或磁性納米顆粒的任一種上偶聯抗原，第二步中則另一種納米顆粒上偶聯多克隆第二抗體。

4.如權利要求1所述的用于納米顆粒標記免疫檢測的磁場輔助介電泳富集方法，其特征在于，所述的傳感納米顆粒包括半導體熒光納米顆粒、稀土摻雜化合物熒光納米顆粒、金屬納米顆粒的任一種，直徑在20到40納米范圍。

5.如權利要求1所述的用于納米顆粒標記免疫檢測的磁場輔助介電泳富集方法，其特征在于，所述的磁性納米顆粒包括氧化物磁性納米顆粒、金屬磁性納米顆粒，直徑在5到10納米范圍內，在水溶液中無沉降，納米顆粒表面修飾水溶性活性基團。

6.權利要求1～5任一所述的用于納米顆粒標記免疫檢測的磁場輔助介電泳富集方法中的富集裝置，其特征在于，由電場裝置和永磁體組成，所述的電場裝置由外到內依次由上下電極層和待測溶液空腔組成，所述的上電極層為在透明基片上設置的透明導電電極，所述的下電極為連續氧化銦錫透明導電玻璃；所述的永磁體產生的磁場方向基本垂直于電極平面表面，在20倍電極直徑尺寸內磁場分布均勻，所述的待測溶液空腔為在上下電極層之間用絕緣體間隔形成的間距在0.3～1毫米的空腔。

7.如權利要求6所述的用于納米顆粒標記免疫檢測的磁場輔助介電泳富集方法中的富集裝置，其特征在于，所述的透明導電電極為單個電極或多個電極陣列。

8.如權利要求6所述的用于納米顆粒標記免疫檢測的磁場輔助介電泳富集方法中的富集裝置，其特征在于，所述的電極尺寸在10到100微米。

9.如權利要求6所述的用于納米顆粒標記免疫檢測的磁場輔助介電泳富集方法中的富集裝置，其特征在于，所述的電極陣列中心間距≥12毫米。