[發明專利]一種菹草的組織培養方法

有效

• 申請號: 201410029624.6
• 申請日: 2014-01-22
• 公開（公告）號: CN103734017A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 徐潤冰;常學秀;王小龍;王龍昌;劉磊;桂秘;鮑志豪
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明大百科專利事務所 53106
• 代理人: 何健

1.一種菹草的組織培養方法，其特征在于，該方法步驟為，從沉水植物菹草上剪取帶節莖段，在自來水中浸泡后剪去葉片，用去離子水沖洗；在超凈工作臺內滅菌，然后把莖段剪成1cm左右的小段，且每一段上須含一個莖節，得到組培的外植體；最后，轉接到底部有MIII固體培養基的玻璃瓶中培養；將玻璃瓶置于無菌培養室，條件：溫度為25±1℃，光暗比12h：12h，培養直到生根；在超凈工作臺內將生根的外植體從固體培養基上轉接到無菌的MIII液體培養基中，繼續置于無菌培養室，條件：25±1℃，光暗比12h：12h，培養成為長勢健康的幼苗。

2.根據權利要求1所述的一種菹草的組織培養方法，其特征在于，該方法具體的步驟為，從沉水植物菹草上剪取嫩尖部分的帶節莖段，長約10cm，在自來水中浸泡1小時，剪去葉片，用去離子水沖洗3遍；在超凈工作臺內滅菌，然后把莖段剪成1cm左右的小段，且每一段上須含一個莖節，得到組培的外植體；最后，轉接到底部有MIII固體培養基的玻璃瓶中培養；置于無菌培養室，條件：25±1℃，光暗比12h：12h，培養直到生根；在超凈工作臺內將生根的外植體從固體培養基上轉接到無菌的MIII液體培養基中，繼續置于無菌培養室，條件：25±1℃，光暗比12h：12h，培養成為長勢健康的幼苗。

3.根據權利要求1或2所述的一種菹草的組織培養方法，其特征在于，MIII液體培養基的配制方法步驟為：以總體積1L計：

1）大量元素稱量并根據順序先后溶解于一定量的純水中，大量元素包括：0.0848gNa₂SiO₃.5H₂O，0.0425g?NaNO₃，0.0068g?KH₂PO₄，0.086g?CaSO₄·2H₂O，0.00745g?KCl，0.0735gCaCl₂·2H₂O，0.0615g?MgSO₄·7H₂O；

2）加入少許1N的鹽酸溶液，攪拌使物質溶解（可用微波加熱或超聲波處理助溶）；

3）加入1ml的100倍微量元素母液；微量元素母液的配方為：取30.8g?H₃BO₄，12.08gMnSO₄.4H₂O，2.209g?ZnSO₄.7H₂O，0.968g?Na₂MoO4.2H₂O，1g?CuSO₄.5H₂O，3.792gAlK(SO₄)₂.12H₂O，0.952g?CoCl₂.6H₂O，1.124g?NiSO₄.7H₂O，0.952g?KBr，0.664g?KI，0.774gH₂SeO₃，溶解于水，定容至100ml;

4）加入10ml?Fe-EDTA溶液（需預先配制FeCl₃貯備液：將2.7g?FeCl₃.6H2O和10ml0.1N?HCl溶解于蒸餾水中，最終定容至100ml，得到FeCl₃貯備液；然后配制Fe-EDTA溶液：將0.372gNa₂EDTA.2H2O溶于大約400ml蒸餾水中，加入5ml上述FeCl₃貯備液，用高壓滅菌鍋滅菌，取出冷卻至室溫后在無菌條件下用無菌蒸餾水定容至500ml）；

5）定容至1L，調整pH為6.0；

6）高溫高壓滅菌，取出冷卻至室溫后使用，或直接置于冰箱冷藏，每次使用前要恢復至室溫。

4.根據權利要求1或2所述的一種菹草的組織培養方法，其特征在于，MIII固體培養基的配方為：以總體積1L計：完成MIII液體培養基配制的1～4步驟后，加入6g瓊脂，20g蔗糖；加熱，煮沸后加入植物激素1mg6-BA、0.1mg?NAA，定容至1L，調整pH為6.0；高溫高壓滅菌，取出凝固后使用，或直接置于冰箱冷藏。

5.根據權利要求1或2所述的一種菹草的組織培養方法，其特征在于，在超凈工作臺內滅菌的方法為，首先使用濃度為0.01%升汞滅菌4min，間歇10min，再使用濃度為0.01%升汞滅菌4min。