[發明專利]一種新型巰基熒光探針、制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201410028685.0
• 申請日: 2014-01-22
• 公開（公告）號: CN103788941A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 陳依軍;王宗強;史少波
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: C09K11/06
• 分類號: C09K11/06;C07C323/25;C07C319/06;G01N21/64;G01N33/58
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 張鉑

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，具體涉及一種新型巰基熒光探針、制備方法及其應用。?

背景技術

熒光標記技術是指利用一些能發熒光的物質共價結合或物理吸附在所要研究的分子的某個基團上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。熒光標記技術起源于20世紀40年代用熒光標記抗體來檢測相應的抗原，隨著現代醫學、分子生物學發展，各種先進的熒光檢測技術及儀器的應用，熒光標記作為一種非放射性的標記技術受到很大程度的重視，并取得了迅速發展，廣泛應用與細胞內外物質檢測、核酸的檢測及疾病早期的診斷等。?

在熒光標記技術中常使用的熒光標記試劑有熒光素類和羅丹明類，其它的熒光標記試劑有多環芳烴化合物及芳香雜環化合物類和一些稀土元素的螯合物等。其中熒光素類標記試劑主要有異硫氰酸熒光素、羥基熒光素、四氯熒光素等；羅丹明類主要包括R101、四乙基羅丹明、和羧基四甲基羅丹明等；其他熒光標記試劑包括萘、蒽、芘吲哚等多環芳烴，吖啶、香豆素、菲錠等芳香雜環化合物，鑭系稀土螯合物，藻紅素等。?

雖然這些傳統熒光試劑應用范圍很廣但是也存在著一些缺陷，如有關多糖的熒光標記目前報道的很少，現有的標記方法大多缺乏選擇性，不能夠很好地反應多糖的生物學性質，現有的熒光試劑不能夠理性的定點標記蛋白質，有些熒光試劑熒光信號弱，熒光信號不穩定，不能夠滿足對生物大分子的生物學性質進行研究。?

因此合成一種能夠特異性標記多糖分子同時能夠對所需研究的蛋白進行理性定點標記成為了一項研究重點。?

發明內容

本發明的目的是針對上述存在問題，提供一種新型巰基熒光探針、制備方法及其應用，可用于多糖、肽、蛋白質、以及核酸特異性標記。本發明所述熒光探針熒光穩定性及強度好，不僅可以對多糖、肽、蛋白質以及核酸進行定性定量分析，更可以以此建立一種快速、簡便示蹤的方法來對上述物質在生物體內代謝動力學進行研究。?

本發明的具體技術方案如下：?

一種具有如式1所示的新型巰基熒光探針：?

其中，R=NH₂或COOH。?

當R=NH₂時，上述熒光探針為2-（2-巰基乙基氨基）苯甲酰胺，?分子式為C₉H₁₂N₂OS，該化合物溶于乙醇之后在340nm的激發光下會發出440nm的發射波長。?

當R=COOH時，上述熒光探針為2-（2-巰基乙基氨基）苯甲酸，?分子式為C₁₀H₁₁NO₃S，該化合物溶于乙醇之后在350nm的激發光下會450nm的發射波長。?

本發明所述式1結構化合物的-SH可以與肽或蛋白質中含有-SH的氨基酸形成二硫鍵，或者與多糖的αβ不飽和羰基結構，或者馬來酰亞胺類結構進行特異性的結合，因此可以與這些大分子物質進行靶向結合，式1結構化合物的苯環與羰基的共軛結構為熒光發光基團，可以使標記后的物質產生熒光。?

基于本發明的技術構思，具有下式結構的化合物也可以用于多糖、肽、蛋白質、以及核酸特異性標記：?

其中，A為任意取代的苯基、多環芳香基或芳香雜環基團，取代基選自鹵素、C1-C6烷烴基、硝基、氨基、羥基、C1-C6烷烴基、醚基等，R為?NH₂,OH,SH,COOH,C1-C6烷烴基,或者COOR₂,其中，R₁或者R₂為C1-C6烷烴基。?

本發明還提供了上述新型巰基熒光探針的制備方法，包括如下步驟：?

（1）將硫氫化鈉與氯乙醛反應得到巰基乙醛；?

（2）將步驟（1）制得的巰基乙醛與2-氨基苯甲酰胺或2-氨基苯甲酰胺經催化劑催化反應得到2-（2-巰基乙基氨基）苯甲酰胺二聚體；?

（3）將步驟（2）制得的2-（2-巰基乙基氨基）苯甲酰胺二聚體用還原劑還原得到2-（2-巰基乙基氨基）苯甲酰胺；?

或者，（4）將步驟（1）制得的巰基乙醛與2-氨基苯甲酰酸經催化劑催化反應得到2-（2-巰基乙基氨基）苯甲酸二聚體；?

（5）將步驟（4）制得的2-（2-巰基乙基氨基）苯甲酸二聚體用還原劑還原得到2-（2-巰基乙基氨基）苯甲酸。?

上述巰基熒光探針制備方法的合成示意式如下：?