[發(fā)明專利]一種人工培養(yǎng)難產(chǎn)孢病原真菌病害的簡易診斷方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410027123.4
• 申請日: 2014-01-21
• 公開（公告）號: CN103789217A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 龔國淑;周游;張敏;陳華保;崔永亮;孫小芳;祁小波;劉娜;李沛利;楊繼芝
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 四川君士達(dá)律師事務(wù)所 51216
• 代理人: 芶忠義

1.一種人工培養(yǎng)難產(chǎn)孢病原真菌病害的簡易診斷方法，其特征在于，該人工培養(yǎng)難產(chǎn)孢病原真菌病害的簡易診斷方法包括以下步驟：

步驟一，選擇用于獲得病原菌的材料，從田間采取具有典型癥狀的病樣，裝入潔凈的自封袋內(nèi)，帶回實(shí)驗室在15℃下放置12h～24h，制備添加鏈霉素或孟加拉紅，鏈霉素終濃度為30μg/mL，孟加拉紅終濃度為33ug/mL的清水瓊脂；

步驟二，在體視顯微鏡下觀察典型癥狀部位的真菌結(jié)構(gòu)，找到優(yōu)勢類群并挑取孢子，轉(zhuǎn)移少量孢子到清水瓊脂小方塊上，然后用無菌的長針灸針或用細(xì)長的縫衣針制作的解剖針挑取單個孢子，按照單孢分離方法獲得粘有單個孢子的瓊脂塊3個～5個；

步驟三，將瓊脂塊轉(zhuǎn)移到添加抗細(xì)菌物質(zhì)的PDA上培養(yǎng)直到長出菌落，得到一個確定形態(tài)的孢子對應(yīng)的相應(yīng)菌落；

步驟四，然后將培養(yǎng)物接種驗證，通過發(fā)病部位的病原形態(tài)+分子數(shù)據(jù)信息（如ITS序列）共同鑒定病原物的種類。

2.如權(quán)利要求1所述的人工培養(yǎng)難產(chǎn)孢病原真菌病害的簡易診斷方法，其特征在于，在步驟一中，放置時間不大于48h。

3.如權(quán)利要求1所述的人工培養(yǎng)難產(chǎn)孢病原真菌病害的簡易診斷方法，其特征在于，在步驟二中，觀察真菌結(jié)構(gòu)還可以選擇直接剪取病斑在光學(xué)顯微鏡低倍視野下。

4.如權(quán)利要求1所述的人工培養(yǎng)難產(chǎn)孢病原真菌病害的簡易診斷方法，其特征在于，該人工培養(yǎng)難產(chǎn)孢病原真菌病害的簡易診斷方法的診斷程序為癥狀觀察，鏡檢病部，確定優(yōu)勢真菌，單孢子法分離，用單孢子對應(yīng)的菌落進(jìn)行致病性測定，完成柯赫法則，對致病菌進(jìn)行鑒定，確定病害的真正病原菌。