[發明專利]H5N1亞型禽流感與鴨腸炎病毒細菌人工染色體質粒

無效

• 申請號: 201410027032.0
• 申請日: 2014-01-22
• 公開（公告）號: CN103882056A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 金梅林;鄒忠;李淑云
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N1/21;C12N15/66;C12N7/01;A61K39/295;A61K39/145;A61K39/245;A61P31/16;A61P31/22;C12R1/19
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

1.一種H5N1亞型禽流感病毒與鴨腸炎病毒人工染色體質粒pBAC-C-KCE-HA5，其特征在于：在鴨腸炎病毒人工染色體的質粒pBAC-C-KCE中插入H5N1亞型禽流感病毒ha基因的片段，所述的質粒pBAC-C-KCE的基因結構如圖7所示，含有質粒pBAC-C-KCE的大腸桿菌DH10B-1S₂/BAC-C-KCE保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO：M2013377，所述人工染色體質粒pBAC-C-KCE-HA5的基因結構見圖14所示，其核苷酸序列全長為169,784bp。

2.一種表達H5N1亞型禽流感病毒與鴨腸炎病毒人工染色體質粒pBAC-C-KCE-HA5的大腸桿菌DH10B-1S₂/BAC-C-KCE-HA，其特征在于：該大腸桿菌保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC?NO：M2013378，所述質粒pBAC-C-KCE-HA5的基因結構組成如圖14所示。

3.一種構建H5N1亞型禽流感病毒與鴨腸炎病毒人工染色體質粒pBAC-C-KCE-HA5的方法，其特征在于該質粒是通過如下步驟制備得到的：

（1）將登錄號為GenBank?ID:KF263690的鴨腸炎病毒C-KCE的全基因組，通過同源重組的方法插入到BAC質粒上得到鴨腸炎病毒細菌人工染色體質粒pBAC-C-KCE，含有該質粒的大腸桿菌DH10B-1S₂/BAC-C-KCE，保藏在中國典型培養物保藏中心，其保藏編號為CCTCCNO：M2013377。

（2）將質粒pRThGA改造為pRTHGA1，在pRTHGA1質粒上插入H5N1亞型禽流感病毒ha基因，該基因的登錄號為temporary?GenBank?accession?NO:KJ003987，得到重組質粒pRTHGA-HA5，其結構如圖11所示；

（3）運用MAGIC的方法將質粒pRTHGA-HA5中的禽流感病毒ha基因插入鴨腸炎病毒細菌人工染色體質粒pBAC-C-KCE中，得到含有禽流感病毒ha基因和鴨腸炎病毒基因的重組質粒pBAC-C-KCE-HA5，其結構見圖16所示，核苷酸序列全長為169,784bp；含有重組質粒pBAC-C-KCE-HA5的大腸桿菌DH10B-1S₂/BAC-C-KCE-HA，保藏在中國典型培養物保藏中心，其保藏編號為CCTCC?NO：M2013378。

4.權利要求1所述的質粒在制備H5N1亞型禽流感病毒與鴨腸炎病毒活載體疫苗中的應用。