[發明專利]用于人類藥物致聾基因突變篩查的引物、探針及其使用方法

無效

• 申請號: 201410026187.2
• 申請日: 2014-01-21
• 公開（公告）號: CN103937875A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 曾驥孟;莊建立;劉斌;賴金嬌
• 申請（專利權）人: 芮寶生物醫藥科技（廈門）有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 寧波市鄞州盛飛專利代理事務所(普通合伙) 33243
• 代理人: 張向飛

技術領域

本發明屬于基因檢測技術領域，特別涉及用于人類藥物致聾基因突變篩查的引物、探針及其使用方法。?

背景技術

耳聾是嚴重影響人類健康的一種常見疾病，也是臨床上最常見的遺傳性疾病之一，因其病因復雜、發生率高且治療困難，從而極大的影響著患者的人際交往與生活質量。據統計，耳聾在新生兒中的發病率約為1‰～3‰，全世界約有7000萬人罹患不同程度的聽力缺損，而我國是世界上聽力障礙人口最多的國家，在全國各類殘疾人中，聽力殘疾約占總數的24%，累及全國數千萬個家庭。?

耳聾的致病因素有很多，包括遺傳因素和環境因素等，其中約50%-60%由遺傳因素導致，即遺傳性耳聾。在大量遲發性聽力下降的患者中，許多也是由于自身基因缺陷或由于基因缺陷和多態性造成對環境因素的易感性增加而致病。根據是否伴有耳外組織的異常或病變，遺傳性耳聾分為綜合征性耳聾（SHL）和非綜合征性耳聾（NSHL），其中NSHL占70%甚至更多。而根據遺傳方式的不同又可將遺傳性耳聾分為常染色體顯性遺傳（DFNA）、常染色體隱性遺傳（DFNB）、X連鎖遺傳、Y連鎖遺傳及線粒體遺傳五類，其中以DFNB最為常見，約占60%～75%；其次為DFNA，約占20%～30%。一般情況下，DFNB多表現為語前聾或先天性耳聾，DFNA多表現為語后聾或漸進性聽力下降。?

隨著基因組學以及分子生物學技術的迅猛發展，對于遺傳性耳聾相關基因及發病機制的研究已經取得了很大的進展。研究發現，在70%～80%的遺傳性耳聾患者中可發現致聾基因突變，已知有數百個基因與遺傳性耳聾有關，且絕大多數的遺傳性耳聾為單基因病，而耳聾相關的遺傳基因突變在正常群體中也并不少見，在我國現有人口中，攜帶遺傳性致聾基因的比例約為6%。研究結果還表明，遺傳性耳聾的致病基因及同一基因的突變位點在不同種族，甚至在同一種族的不同地區的人群中都不完全相同。目前，歐美發達國家列入耳聾致病基因臨床檢測的項目包括EYA1、TIMM8A、GJB2、GJB6、SLC26A4、USH2A、USH3A、POU3F4、WFS1、COCH、OTOF、TECTA以及線粒體DNA（mtDNA）等，但最普遍也是最基本的檢測項目是GJB2、GJB6、SLC26A4、COCH和mtDNA基因的突變檢測。而國內進行的耳聾分子流行病學調查結果顯示，我國大部分的遺傳性耳聾主要由GJB2、GJB3、SLC26A4以及mtDNA等為數不多的幾個基因突變引起，對這幾個基因進行遺傳學檢測可以明確耳聾人群中40%的遺傳學病因，結合家族史分析和查體可以診斷95%以上的遺傳性耳聾，這為我國耳聾致病基因篩查以及臨床基因診斷工作的大規模開展提供了理論依據。?

mtDNA是唯一存在于人細胞質中的DNA分子，是獨立于細胞核染色體外的基因組，具有自我復制、轉錄和編碼功能，但同時也受核DNA的調控。研究發現，mtDNA突變與遺傳性耳聾有著密切關系，線粒體12S?rRNA（MT-RNR1）上C1494T和A1555G的點突變可通過改變mtDNA的空間結構，使形成新的與氨基糖甙類抗生素結合的位點，從而導致突變攜帶者對此類藥物敏感，造成使用正常劑量甚至微量該類藥物即可導致突變攜帶者出現聽力損失。流行病學調查結果表明，C1494T和A1555G突變在中國耳聾患者中的攜帶率分別為0.45%和3.34%。由于mtDNA遺傳屬于母系遺傳，mtDNA的突變可通過母親遺傳給后代，所以檢測到女性患者攜帶該基因突變時，需要提醒其本人及后代一定要禁止使用氨基糖甙類藥物。?