[發明專利]一種改變植物花型的雙35S過表達載體及其應用

無效

• 申請號: 201410024489.6
• 申請日: 2014-01-20
• 公開（公告）號: CN103710382A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 胡麗芳;賀浩華;劉世強;朱昌蘭;邊建民;歐陽林娟;彭小松;賀曉鵬;傅軍如;陳小榮
• 申請（專利權）人: 江西農業大學
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;C12N15/66;A01H5/00
• 代理公司: 南昌洪達專利事務所 36111
• 代理人: 劉凌峰

技術領域

本發明屬于植物基因工程領域，具體涉及一種改變植物花型的雙35S過表達載體及其應用。?

背景技術

花型是花卉作物重要的觀賞性狀,?通過分子生物學手段鑒定出控制花發育的基因并通過改變其表達方式,?可有目的地改變花型,?將對花卉業產生重大影響。對模式植物擬南芥和金魚草突變體的遺傳分析和同源異形化現象的研究表明,?編碼轉錄因子的一組同源異形基因控制著花的發育。這些基因被相應地分為A，B和C類，并隨之提出花器官發育的ABC基因模型。在經典的ABC模型中，認為花器官是由A，B和C三類基因共同作用的結果，以擬南芥為例，A類基因?(APETALA1,?AP1；APETALA2,?AP2)單獨決定萼片，A類基因和B類基因?(APETALA3,?AP3;?PISTILLATA,?PI)?共同決定花瓣，B類基因和C類基因?(AGAMOUS,?AG)?共同決定雄蕊，C類基因單獨決定心皮，同時，C基因還參與分生組織決定性的調控。這三類基因利用單獨或重疊的基因表達區域對花發育過程進行調控，形成相應的花器官。隨著研究的進展，ABC模型逐漸發展為ABCDE模型，D類基因SEEDSTICK（STK）的功能與C基因部分重疊，影響胚珠的發育。E基因SEPALLATA1-SEPALLATA4（SEP1-SEP4）在全局上對花瓣、雄蕊和雌蕊進行調控。通過改變同源異形基因的表達方式，按人們需要設計新的花型已成為可能。如利用轉基因技術抑制AG基因的表達，其雄蕊被花瓣取代，心皮被新的花替代，形成重瓣花，為創造觀賞價值較高的重瓣花展示了美好的前景。將矮牽牛同源異型基因FBP2與35S啟動子相連，構建表達載體PBP2導入煙草，導致煙草雄蕊上產生花瓣。將英國梧桐的花器官決定基因PaAG(C類基因)轉化煙草后,?花瓣的形態發生了很大變化。OsMADS58屬于水稻C功能基因，通過分析OsMADS58的RNAi植株發現其雄蕊會部分轉化成漿片，產生包含漿片、雄蕊和類似心皮在內的一系列花器官反復發生。鑒于OsMADS58在花發育中的重要作用，推測通過提高該基因的表達水平可改變植物的花型。啟動子在決定基因表達方面起關鍵作用，選擇合適的啟動子是增強外源基因表達首先要考慮的問題。35S啟動子是目前植物基因工程中使用最多的組成型啟動子,?相關研究表明2×35S啟動子的強度要遠遠高于單35S。為更大限度地提高OsMADS58的表達水平來改變花型，利用2×35S啟動子來調控OsMADS58的超量表達具有一定的實踐意義。?

發明內容

本發明的目的在于提供一種改變植物花型的雙35S過表達載體及其應用，該載體含有來自水稻C功能基因OsMADS58基因的上游連有2×35S組成型啟動子。所述OsMADS58的cDNA來源于水稻（Oryza?sativa），GenBank登錄號為AB232157。?

本發明的另一目的是將該載體應用在植物特別是花卉中改變花型。?

?上述載體中，用于構建所屬植物表達載體的起始載體為含雙35S的pHB。?

?本發明的上述植物表達載體為pHB-2×35S-OsMADS58，由下述方法構建而成：?

??(1)?根據NCBI上水稻OsMADS58的公布的序列（登錄號為AB232157），設計引物為：

上游引物：5′-GGATCCATGCACATATACAAAGAGCAGGA-3′

下游引物：5′-TCTAGATTATCTTTCATCTGACATAAAGG-3′

上游引物添加BamH?I位點，下游引物添加XbaI位點，以水稻第一鏈cDNA為模板擴增，獲得OsMADS58基因的全長cDNA；

(2)??回收并純化OsMADS58全長cDNA片段，并將其連接到pMD-18T載體上，采用堿裂解法提取質粒DNA，通過PCR檢測和酶切檢測獲得重組質粒pMD18-OsMADS58