[發(fā)明專利]一種多肽、制備方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410023908.4
• 申請(qǐng)日: 2014-01-17
• 公開（公告）號(hào): CN104292305B
• 公開（公告）日: 2017-06-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉寧;翟仙敦;王帥寶;張學(xué)智
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K7/08
• 分類號(hào): C07K7/08;C07K1/16;C07K1/06;A61K38/10;A61P11/06;A61P11/02;A61P37/08
• 代理公司: 鄭州睿信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司41119
• 代理人: 牛愛周

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種多肽，同時(shí)還涉及該多肽的制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

過敏性鼻炎哮喘綜合癥是指同時(shí)發(fā)生的臨床或亞臨床的上和下呼吸道的過敏性癥狀，兩者往往同時(shí)并存。過敏性鼻炎哮喘癥的上、下呼吸道的免疫學(xué)和病理學(xué)改變分別是發(fā)生在鼻黏膜和支氣管黏膜的過敏性炎癥，即炎癥細(xì)胞滲出，嗜酸性粒細(xì)胞、肥大/嗜堿細(xì)胞增多。目前對(duì)這種疾病的治療尚無特效藥物，如應(yīng)用吸入性皮質(zhì)激素或β-2興奮劑等對(duì)哮喘的治療也只能是緩解癥狀，并不能治愈或使病程逆轉(zhuǎn)。

類胰蛋白酶是主要由肥大細(xì)胞分泌的一種炎癥介質(zhì)，在過敏反應(yīng)炎癥發(fā)生過程中起到一定的促進(jìn)作用。肥大細(xì)胞能夠分泌α、β和γ類胰蛋白酶，其中β-類胰蛋白酶是肥大細(xì)胞脫顆粒過程中釋放的主要同工酶。β-類胰蛋白酶能夠促進(jìn)人類肥大細(xì)胞脫顆粒，加劇組胺型支氣管收縮，增加嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的遷移以及肺肌細(xì)胞和呼吸道平滑肌細(xì)胞的增殖。研究證明類胰蛋白酶抑制劑可以降低小鼠哮喘模型中炎癥的發(fā)生率，可以減少嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)和支氣管的反應(yīng)性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種用于治療過敏性鼻炎哮喘綜合癥的多肽。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種多肽的制備方法。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種多肽在制備治療過敏性鼻炎的藥物方面的應(yīng)用。

本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種多肽在制備治療哮喘的藥物方面的應(yīng)用。

本發(fā)明的第五個(gè)目的是提供一種多肽在制備治療過敏性鼻炎哮喘綜合癥的藥物方面的應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種多肽，其氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示。具體為：亮氨酸-纈氨酸-精氨酸-甘氨酸-半胱氨酸-色氨酸-蘇氨酸-賴氨酸-絲氨酸-酪氨酸-脯氨酸-脯氨酸-賴氨酸-脯氨酸-半胱氨酸-苯丙氨酸-纈氨酸-精氨酸多肽，記為亮-精多肽。

上述多肽的組織提取制備方法（動(dòng)物組織提取法），包括下列步驟：

1）取北豹蛙皮膚，剁碎后置于4℃的酸化乙醇中消化12h，后離心分離，取上清液旋轉(zhuǎn)濃縮，冷凍干燥，得凍干物；

2）體積排阻色譜法分離：將步驟1）所得凍干物置于濃度為2mol/L的乙酸中處理后，裝入葡聚糖凝膠G50色譜柱中，以濃度為2mol/L的乙酸平衡，柱子流速10mL/h，收集色譜峰60組分，凍干，即得所述多肽。

所述酸化乙醇是由乙醇與濃度為0.7mol/L的鹽酸按體積比為3:1的比例配制而成的；所述酸化乙醇的用量為：每g皮膚組織加入8mL酸化乙醇。

步驟1）中所述離心分離的溫度為4℃，離心力為3000g，時(shí)間為30min。

上述多肽的化學(xué)合成制備方法（人工合成法），包括下列步驟：

1）以2-(1H-苯并三偶氮L-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯為縮合劑，采用王樹脂F(xiàn)moc-氨基酸-王樹脂固相合成法逐一耦合每一個(gè)保護(hù)氨基酸，合成得到全保護(hù)的肽鏈樹脂；

2）用切割試劑對(duì)側(cè)鏈全保護(hù)的肽鏈樹脂進(jìn)行切割，將肽鏈從樹脂上裂解下來并去除側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)，得多肽粗品；

3）將多肽粗品溶于二甲基亞砜與水按照體積比為2:8的比例配制而成的混合物中，制成多肽濃度為0.01mmol/L的粗品溶液；

4）將步驟3）所得粗品溶液采用制備型HPLC進(jìn)行純化，用電噴射質(zhì)譜檢測(cè)純化的目的多肽，即得。

步驟2）中所述切割試劑為三氟乙酸、苯酚、水、三異丙基硅烷按照體積比為88:5:5:2的比例配制而成的混合物。

步驟4）中所述純化的色譜條件為：色譜柱為Nucleosil C-18，250×20mm；流動(dòng)相A為三氟乙酸/水=0.1:99.9（v/v），流動(dòng)相B為三氟乙酸/乙腈/水=0.1:80.0:19.9（v/v/v）；線性梯度10%～70%B/70min，0.68%乙腈/min。

上述多肽在制備治療過敏性鼻炎的藥物方面的應(yīng)用。

上述多肽在制備治療哮喘的藥物方面的應(yīng)用。

上述多肽在制備治療過敏性鼻炎哮喘綜合癥的藥物方面的應(yīng)用。

將所述多肽用滅菌雙蒸水或PBS緩沖液稀釋制成濃度為0.1～5mg/mL的混合物，使用時(shí)，將該混合物直接滴入鼻腔或霧化后吸入鼻腔。用藥周期為每天一次，連續(xù)7天。