[發明專利]抗豬傳染性胃腸炎病毒與豬流行性腹瀉病毒卵黃抗體及其制備方法

有效

• 申請號: 201410022975.4
• 申請日: 2014-01-17
• 公開（公告）號: CN104788561B
• 公開（公告）日: 2019-07-16
• 發明（設計）人: 侯艷紅;王貴華;趙亞榮;劉明明;滿坤;于萍萍;盧會英
• 申請（專利權）人: 北京大北農科技集團股份有限公司動物醫學研究中心;福州大北農生物技術有限公司;北京科牧豐生物制藥有限公司;北京大北農科技集團股份有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C07K16/02;A61K39/42;A61P31/14
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• 代理人: 暫無信息

本發明公開了抗豬傳染性胃腸炎病毒與豬流行性腹瀉病毒卵黃抗體，其以豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒的二聯滅活疫苗為免疫原，免疫產蛋雞，再從卵黃中純化出卵黃抗體而成，其中，所述的豬傳染性胃腸炎病毒為豬傳染性胃腸炎病毒HB08株，其保藏號為CGMCC No.7807，所述的豬流行性腹瀉病毒為豬流行性腹瀉病毒ZJ08株，保藏號CGMCC No.7806。本發明制備的卵黃抗體性狀良好，安全，本發明制備的卵黃抗體人工感染治愈率達100%，明顯高于經典毒株制備的卵黃抗體治愈率，臨床病例治愈率93.0%，臨床預防試驗中可使試驗豬的腹瀉發生率降低17~24個百分點。

技術領域

本發明涉及一種卵黃抗體的制備方法，具體是一種治療豬傳染性胃腸炎病毒與豬流行性腹瀉病毒卵黃抗體的制備方法。

背景技術

豬傳染性胃腸炎（porcine transmissible gastroenteritis, TGE）和豬流行性腹瀉（porcine epidemic diarrhoea, PED）是引起豬腹瀉的兩種重要接觸性病毒性腸道傳染病，均以嘔吐、嚴重水樣腹瀉、脫水和對2周齡以內仔豬的高度致死率為特征。目前尚無有效的治療方法。臨床上經常有豬傳染性胃腸炎和豬流行性腹瀉感染發生的報道，嚴重制約養殖業的順利發展。

卵黃抗體與初乳中母源抗體的作用機理相似，都是以被動免疫的方式使仔豬獲得免疫力，達到保護仔豬的目的。因而研制抗豬傳染性胃腸炎和豬流行性腹瀉卵黃抗體，用于豬傳染性胃腸炎和豬流行性腹瀉的防制具有重要意義。

曾有抗豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒卵黃抗體制備的報道，但是隨著臨床流行毒株的變異，原有卵黃抗體保護性越來越差。本試驗以臨床上新近分離的豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒流行毒株為免疫抗原，免疫產蛋雞，收集高效價卵黃，并對制備的卵黃抗體的治療效果進行了研究，從而為防制豬傳染性胃腸炎和豬流行性腹瀉，提供一種成本低、治療效果好、易于生產且無環境污染的生物制品。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供一種豬傳染性胃腸炎病毒與豬流行性腹瀉病毒卵黃抗體的制備制備方法。

本發明提供的抗豬傳染性胃腸炎病毒與豬流行性腹瀉病毒卵黃抗體，其為以豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒的二聯滅活疫苗為免疫原，免疫產蛋雞，再從卵黃中純化出卵黃抗體而成，其中，所述的豬傳染性胃腸炎病毒為豬傳染性胃腸炎病毒HB08株，其保藏號為CGMCC No. 7807，所述的豬流行性腹瀉病毒為豬流行性腹瀉病毒ZJ08株，保藏號CGMCC No.7806。

其中，所述的二聯滅活疫苗為弗氏完全佐劑疫苗或弗氏不完全佐劑疫苗。

本發明提供的豬傳染性胃腸炎病毒與豬流行性腹瀉病毒卵黃抗體的制備方法，包括如下步驟：

1）制備豬傳染性胃腸炎病毒TGEV和豬流行性腹瀉病毒PEDV二聯滅活疫苗：將豬傳染性胃腸炎病毒HB08株和豬流行性腹瀉病毒ZJ08株病毒液等病毒量混合，加入0.2~0.5%的甲醛，置于35℃~37℃恒溫培養箱24h~36h進行滅活，加入等量的弗氏完全佐劑或弗氏不完全佐劑制備成豬傳染性胃腸炎和豬流行性腹瀉二聯弗氏完全佐劑疫苗或弗氏不完全佐劑疫苗；

2）動物免疫：免疫方式均為胸部肌肉分點注射，共免疫五次。首免、二免、三免均間隔兩周，三免后一個月四免，四免后兩周五免。首次免疫lml TGEV-PEDV 二聯弗氏完全佐劑疫苗，二免、三免和四免均接種TGEV-PEDV 二聯弗氏不完全佐劑疫苗，劑量分別為分別為2ml 、4ml和2ml，五免接種2ml TGEV-PEDV 二聯病毒液，

3）抗體效價測定：第五次免疫后１周開始每隔7日收集高免蛋，并利用瓊脂擴散試驗檢測高免卵黃抗體效價，待卵黃抗體效價達到1:64時收集卵黃；