[發(fā)明專利]化合物Aspochalasin V及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410021344.0
• 申請(qǐng)日: 2014-01-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103787953A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐金鐘;彭加飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州維康科技有限公司
• 主分類號(hào): C07D209/96
• 分類號(hào): C07D209/96;C12P17/10;A61K31/403;A61P35/00;A23L1/29
• 代理公司: 杭州天勤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種化合物Aspochalasin?V及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

癌癥是嚴(yán)重威脅人類生命健康的常見(jiàn)病、多發(fā)病，死亡率極高，全世界每年死于癌癥的約有430萬(wàn)人，我國(guó)每年死于癌癥的約有100萬(wàn)人，而且這種情況還在加劇。因此，研發(fā)具有抗腫瘤活性的藥物具有重要的意義。

微生物的多樣性及其次生代謝產(chǎn)物的多樣性是發(fā)現(xiàn)藥物先導(dǎo)化合物的重要基礎(chǔ)。海洋是一個(gè)高鹽、寡營(yíng)養(yǎng)甚至低溫、高壓的環(huán)境，環(huán)境較陸地的差別極大，其特殊的生存環(huán)境導(dǎo)致了海洋微生物獨(dú)特的代謝規(guī)律，目前，已經(jīng)從眾多的海洋微生物的次級(jí)代謝產(chǎn)物中分離、純化得到了結(jié)構(gòu)新穎且具有顯著活性的化合物。

曲霉屬真菌是發(fā)酵工業(yè)和食品加工業(yè)的重要菌種，已被利用的近60種。2000多年前，我國(guó)就用于制醬，曲霉屬真菌也是釀酒、制醋曲的主要菌種。曲霉屬真菌也是活性天然產(chǎn)物的主要生產(chǎn)者之一，其代謝產(chǎn)物幾乎包括所有已發(fā)現(xiàn)的結(jié)構(gòu)類型。目前已從曲霉屬真菌中分離多種具有抗腫瘤活性的化合物，如：公開(kāi)號(hào)為CN102311442A的中國(guó)專利從海洋真菌煙曲霉（Aspergillus?fumigatus）MF330的固體發(fā)酵物中分離純化得到了兩個(gè)螺內(nèi)酰胺類生物堿化合物，這兩個(gè)化合物能夠作為NFКB的抑制劑，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡；公開(kāi)號(hào)為CN103058846A的中國(guó)專利從棘孢曲霉（Aspergillus?aculeatus）IBPT-3的發(fā)酵物中分離純化得到了一種具有抗腫瘤活性的苯醌衍生物；等等。

Aspochalasin類化合物為細(xì)胞松弛素類的一種，該類化合物被發(fā)現(xiàn)具有抗腫瘤或抗HIV活性。如公開(kāi)號(hào)為CN102260271A的中國(guó)專利從黃炳曲霉（Aspergillus?flavipes）ZHN1-09的發(fā)酵物中分離純化出一個(gè)細(xì)胞松弛素類化合物，該化合物可作為細(xì)胞增殖抑制劑或抗腫瘤劑；Rochfort?Simone等發(fā)現(xiàn)aspochalasin?L對(duì)HIV-1整合酶具有抑制活性，其半數(shù)抑制濃度IC₅₀為71.7μM（Journal?of?Antibiotics,2005,58(4),279-283）。然而至今未見(jiàn)有關(guān)于甲硫基取代Aspochalasin類化合物及其抗腫瘤活性的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種化合物Aspochalasin?V，該化合物為從海洋真菌黃柄曲霉（Aspergillus?flavipes）Z-4的發(fā)酵培養(yǎng)物中提取得到的天然活性物質(zhì)，具有抗腫瘤活性。

一種化合物Aspochalasin?V，其結(jié)構(gòu)如式（Ⅰ）所示：

本發(fā)明提供了所述的化合物Aspochalasin?V的制備方法，包括以下步驟：

（1）將黃柄曲霉CCTCC2013631接入培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；

（2）發(fā)酵培養(yǎng)后，分離得到發(fā)酵液，用有機(jī)溶劑對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行萃取，得到萃取液；

（3）將所述的萃取液濃縮后依次經(jīng)正相硅膠色譜柱和高效液相色譜分離純化，獲得所述的化合物Aspochalasin?V。

黃柄曲霉CCTCC2013631，分類命名為黃柄曲霉（Aspergillus?flavipes），完整命名為黃柄曲霉（Aspergillus?flavipes）Z-4，該菌株已保藏于位于中國(guó)武漢武漢大學(xué)的中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（簡(jiǎn)稱CCTCC），保藏編號(hào)為CCTCC?NO：M2013631，保藏日期為2013年12月4日。

黃柄曲霉CCTCC2013631從海蟑螂的腸道中分離得到，該菌株的菌落生長(zhǎng)速度較快，質(zhì)地疏松，平坦，絲絨放射狀，邊緣整齊；分生孢子球形，分生孢子頭呈放射狀。

所述的培養(yǎng)基為2216E液體培養(yǎng)基。該液體培養(yǎng)基適宜于海洋微生物的生長(zhǎng)。

所述發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為23～28℃，時(shí)間為25～35天。優(yōu)選的，所述發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為25℃，時(shí)間為28天。

所述的發(fā)酵培養(yǎng)可以采用靜態(tài)培養(yǎng)方式，即可不進(jìn)行振蕩搖培。

萃取時(shí)，有機(jī)溶劑可用乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿等，較優(yōu)的為乙酸乙酯；所述有機(jī)溶劑與發(fā)酵液的體積比為1：1。

經(jīng)正相硅膠色譜柱分離時(shí)，洗脫溶劑為二氯甲烷/甲醇，洗脫時(shí)，依次采用體積比為100:1、98:2、95:5、90:10、80:20、50:50、0:100的二氯甲烷/甲醇混合液進(jìn)行洗脫，收集的為體積比為90：10的二氯甲烷/甲醇混合液洗脫的餾分。