[發(fā)明專利]快速檢測中草藥中汞含量的納米金試劑盒及其使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410021265.X
• 申請日: 2014-01-16
• 公開（公告）號: CN103776827A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發(fā)明（設計）人: 黃生權;付萌;柴春彥;劉國艷;唐青濤;趙娜;秦垂新
• 申請（專利權）人: 無限極（中國）有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 上海漢聲知識產(chǎn)權代理有限公司 31236
• 代理人: 牛山;陳少凌

技術領域

本發(fā)明涉及一種快速檢測中草藥重金屬方法，尤其是一種快速檢測中草藥中汞含量的納米金試劑盒及其使用方法。

背景技術

重金屬含量超標是影響我國中藥材質(zhì)量下降及中藥制劑出口的重要因素，同時也是引起國內(nèi)外關注的公共健康問題。中草藥的污染主要來源于環(huán)境污染，主要因大量含重金屬的工廠排泄物污染水源、土壤及空氣等引起。其次，由于工礦區(qū)含有重金屬元素氣體及汽車尾氣的排放也是造成現(xiàn)有生態(tài)污染的不可忽視的因素。另外，在中草藥的加工過程中，也會因在加工包裝過程中形成重金屬元素的污染。加之中草藥本身對重金屬元素具有較強的富積能力，以上綜合因素導致我國中藥材重金屬污染狀況較為嚴重。國內(nèi)學者調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，我國常見的中草藥材中汞的超標率達到6.9%，尤其是以中成藥中汞超標更為嚴重。汞元素是毒性非常強的重金屬元素之一，汞可以和含有巰基的酶、膜蛋白及其它生物大分子結合，其對人及動物體的作用范圍非常廣泛，汞具有神經(jīng)毒性、腎臟毒性、免疫毒性、生殖毒性、胚胎發(fā)育毒性及非特異損傷毒性，長期慢性攝入會嚴重影人體的健康。因而建立快速檢測中草藥中汞含量的方法對從源頭控制中藥物質(zhì)量具有極其重要的意義。

當前檢測中草藥中汞的傳統(tǒng)儀器測試方法有基于雙硫腙的分光光度法、原子吸收法、等離子發(fā)射光譜法、氫化物發(fā)生—原子熒光光譜分析法及生物傳感器法。分光光度法由于測試過程相當復雜、穩(wěn)定性及重復性差而受到極大的限制；原子吸收法及等離子發(fā)射光譜對測試銅、鉛、鎘、鎳、鈷等元素均有一定的優(yōu)勢，但對汞的檢測效果并不理想，表現(xiàn)為靈敏度低、重復性及穩(wěn)定性差等缺點。氫化物發(fā)生—原子熒光光譜分析法是較為理想的測試中草藥重金屬元素殘留的方法，但仍需要大型昂貴的儀器及專業(yè)操作人員，檢測周期長，操作復雜，無法實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測。近些年來，許多學者設計了富含胸腺嘧啶的核苷酸對，并用其來標記納米金顆粒，由于檢樣中少量存在的汞離子會使核苷酸的胸腺嘧啶堿基發(fā)生錯配，因而可以使納米膠體金溶液發(fā)生顯著的顏色的變化，從而可靈敏地檢測汞的痕微量殘留。也有研究人員直接應用半胱氨酸、胸腺嘧啶和尿酸等直接標記膠體金，從而實現(xiàn)對飲用水中汞離子的快速檢測。在上述方法中，使用堿基對標記納米金時，由于要合成含有特定基團的短鏈核苷酸，成本較高且反應條件苛刻，也不能適合于現(xiàn)場快速、靈敏檢測。利用半胱氨酸、胸腺嘧啶及尿酸標記膠體金時，存在著檢測靈敏度過低且重復性差的缺點，也不適合于中草藥中汞元素的痕微量檢測。

經(jīng)對現(xiàn)有技術文獻檢索發(fā)現(xiàn)，專利申請?zhí)枮?00510016289.7的中國專利，名稱為“汞檢測試紙及其制備方法”，該專利利用二苯碳酰二肼為顯色劑，將其和溴化十六烷基甲酰胺的乙醇液混合后，制成攜帶方便、操作簡單的試紙條。由于二苯碳酰二肼是一種廣譜的顯色劑，其對其它重金屬如鉻、鉛、銅、鎘、鎳等均有靈敏的顯色反應，因而其檢測汞元素的特異性很差，需要加入大量的不同種類的掩蔽劑對其它離子進行屏蔽，而這些掩蔽劑的加入同時也降低了該試紙條的靈敏度，無法檢測到低濃度的汞離子。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的缺陷，提高一種快速檢測中草藥中汞含量的納米金試劑盒及其使用方法。

本發(fā)明是通過以下的技術方案實現(xiàn)的；

第一方面，本發(fā)明涉及一種快速檢測中草藥中汞含量的納米金試劑盒，包括1號試劑，2號試劑，含汞的標準溶液；

所述1號試劑的制備方法包括如下步驟：將氯金酸溶液加入二次蒸餾水中，加熱至沸騰，再加入檸檬酸三鈉溶液，攪拌至顏色變?yōu)榫萍t色時，繼續(xù)加熱，之后冷卻至室溫，離心，沉淀用三羥甲基胺基甲烷-氯化氫緩沖液懸浮，即得；

所述2號試劑為三聚氰胺的蒸餾水溶液。

優(yōu)選地，所述加熱至沸騰具體為：加熱至97～100℃，之后保持沸騰狀態(tài)1～3分鐘；所述攪拌的時間為3～6分鐘；所述繼續(xù)加熱為沸騰狀態(tài)下繼續(xù)加熱5～15分鐘。

優(yōu)選地，還包括檢測反應板，所述檢測反應板為8孔或16孔的透明細胞培養(yǎng)板。

優(yōu)選地，所述透明細胞培養(yǎng)板的處理包括如下步驟：將透明細胞培養(yǎng)板用2.0～8.0mol/L的硝酸液浸泡，再用二次蒸餾水清洗3次～6次，除去多余水分，45℃～55℃下烘干即可。

優(yōu)選地，所述1號試劑中懸浮納米金顆粒的粒徑為16～28nm。

優(yōu)選地，所述1號制劑的制備方法中，使用的試劑比例關系如下：氯金酸溶液的質(zhì)量百分比為0.5～1.0%，所述檸檬酸三鈉溶液的質(zhì)量百分比為1%；當所述氯金酸溶液為1～4毫升時，所二次蒸餾水為50～200毫升，檸檬酸三鈉溶液為2～10毫升。