[發明專利]新型非侵入性血型基因檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201410019867.1
• 申請日: 2014-01-16
• 公開（公告）號: CN104342491A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發明（設計）人: 肖文昕
• 申請（專利權）人: 肖文昕
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及醫學生物檢測技術領域，涉及基因檢測在人血型非侵入性檢測中的應用，具體的說，涉及利用非血生物學樣本基因組DNA，通過PCR-RFLP法，檢測個體ABO血型的新型無創試劑盒。

背景技術

血型是對血液分類的方法，通常是指紅細胞的分型，其依據是紅細胞表面是否存在某些可遺傳的抗原物質。到目前為止，已經發現并為國際輸血協會承認的血型系統有30種，其中ABO為最重要血型系統，它的應用已從臨床輸血擴展至生物學、遺傳學、法醫學和人類學等許多方面[1，2]。

對血型的分型一直采用血清學方法，該法簡單快速，但作為ABO血型的研究工具，血清學使進行更深入的研究受到限制，它不能進行ABO血型基因亞型的分型，因此在臨床輸血中存在一定的局限。該方法也不能解釋臨床上表型相同而基因型不合遺傳規律的案例[3]。

目前基因分型技術主要有以下幾種：①PCR-DNA測序法②PCR-RFLP(限制性內切酶酶切)法③PCR-SSP法。PCR-DNA測序法成本較高，檢測時間較長；PCR-SSP法需要設計多對引物，每對引物分別擴增，如果用于鑒定ABO血型基因型則需要擴增多管，PCR擴增產物也需要多孔電泳檢測，而且要設置內對照，實驗比較繁瑣復雜，容易受到多種因素的影響，結果不夠穩定[4]。PCR-RFLP法，結合PCR特異性擴增及限制酶性內切酶酶切，可對1-2條PCR產物進行多態性，成本低，操作簡便，結果穩定。

然而目前，臨床和科研中應用DNA分型技術進行ABO血型分型的研究，在獲得DNA樣本來源方面，大多采用靜脈血樣本。但是，在大規模人群采樣中經常存在血液樣本采樣困難的問題，尤其是對于抽血取樣困難的兒童和一些疑難標本取樣時。并且，血液樣本還存在儲存與運輸困難的問題。而與靜脈血相比，漱口水、毛發和指甲等屬于無創性樣本，具有很多優勢，其特點為被采樣者心理抵觸小，樣本容易儲存與運輸，因此在大規模人群采樣中具有明顯優勢。目前研究表明，漱口水、毛發和指甲作為DNA抽提樣本具有一定的可操作性和應用價值[5，6]。

本發明利用漱口水、毛發和指甲等非血生物學樣本基因組DNA，通過PCR-RFLP法，能精確完成個體ABO血型的檢測。

參考文獻：

趙欽，王樹軍(1997)ABO血型在法醫學的應用.邯鄲醫學高等專科學校學報，1：19.

彭德仁(1991)中國漢族人ABO血型的分布.中國輸血雜志，4(1)：20-23.

徐華，張楊培(2004)PCR在ABO疑難血型鑒定中的應用.軍事醫學科學院院刊，28(1)：85-87.

石寧(1997)ABO血型系統的基因分型.國外醫學：輸血及血液學分冊，20(5)：286-289.

張弘，陳紅帆，安宇，王紅艷，段文元.(2009)指甲游離緣及毛發中核DNA抽提方法的探討.中國循證兒醫學，4(5)：431-435.

閻威，姜先華，呂世惠(1994)唾液及含唾液檢材的DNA分析.中國法醫學雜志，9(2)：65-67.

發明內容

本發明的目的在于提供一種利用非血生物學樣本基因組DNA，通過PCR-RFLP法，檢測個體ABO血型的試劑盒。

為實現上述目的，本試劑盒從漱口水、毛發和指甲等非血生物學樣本中提取基因組DNA，對提取的基因組DNA中的ABO血型系統的三復等位單拷貝基因進行PCR擴增，并利用限制性內切酶酶切擴增片段，然后用瓊脂糖凝膠電泳鑒定檢測樣本的ABO血型。

所述的非血生物學樣本可為含有人口腔上皮細胞的棉拭子或漱口水，人的毛發、指甲、精斑等樣本；

所屬的基因組DNA抽提方法可為飽和氯化鈉法、磁珠法、玻璃粉法、柱分離法等方法，較優為飽和氯化鈉法；

所述的PCR擴增片段為利用引物擴增得到的，位于染色體9q34的ABO等位基因第6、第7外顯子中含有核苷酸差異性的區段，較優為下述引物序列(SEQ?No.1-SEQ?No.4)；

SEQ?NO.1：5'-CCTGTCCCTTTGTTCTCCAA-3’

SEQ?NO.2：5’-AATGTCCACAGTCACTCGCC-3’

SEQ?NO.3：5’-CGCATGGAGATGATCAGTG-3’

SEQ?NO.4：5’-CACAAGTACTCGGGGGAGAG-3’

所述的限制性內切酶為可特異性識別擴增片段中的差異性核苷酸，并酶切該擴增片度的DNA限制性內切酶，較優為Kpn?I及Alu?I；