[發明專利]一種結構特異性沙丁胺醇完全抗原的合成方法

有效

• 申請號: 201410019076.9
• 申請日: 2014-01-16
• 公開（公告）號: CN103755802A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 胥傳來;劉麗強;王利兵
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K14/795;C07K14/77;C07K1/107;C07K16/44;G01N33/53
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種沙丁胺醇完全抗原的合成方法，其特征在于合成路線為：

工藝步驟為：

（1）沙丁胺醇半抗原的制備：

合成一種小分子化合物作為沙丁胺醇半抗原，名稱為4-((2-羥基-2-(4-羥基-3-(羥甲基)苯基)乙基)氨基)戊酸，其分子結構式如式I所示：

式I；

制備步驟：將2-溴-1-[4-羥基-3-(羥甲基)苯基]乙-1-酮溶解于丙酮，加入碳酸鉀后，與二芐基胺反應生成化合物B；在氫化鋁鋰催化下，生成化合物C；再在Pd/C催化下和氫氣生成化合物D；再與乙酰丙酸乙酯還原胺化反應生成化合物E；在堿性條件下水解，最后于酸性條件下重結晶后生成式I所示沙丁胺醇半抗原；

（2）沙丁胺醇完全抗原的制備：

方案A：將沙丁胺醇半抗原，用DMF溶解，與NHS、EDC反應，式I所示化合物:NHS:EDC的摩爾比為1:?1.5:?2，在4℃下、避光攪拌反應1h，再在室溫25℃下反應12h；取載體蛋白，沙丁胺醇半抗原與載體蛋白的摩爾比為80:1，用0.1M?pH9.6?碳酸鹽緩沖液溶解，其中溶解后的蛋白濃度大于3mg/mL，且碳酸鹽緩沖液與DMF的體積比例為5:1；將活化的半抗原溶液慢速滴加到蛋白溶液中，室溫下反應24h，用PBS緩沖液透析2天，期間換液4次，即得到沙丁胺醇完全抗原；

或方案B：將沙丁胺醇半抗原，用DMF溶解，與三正丁胺、氯甲酸異丁酯反應，半抗原:?三正丁胺:?氯甲酸異丁酯的摩爾比為1:?1.2:?1.2，0℃反應1h；取載體蛋白，半抗原與載體蛋白的摩爾比為80:1，用?0.1M?pH9.6?碳酸鹽緩沖液溶解，0℃預冷30min，其中溶解后的蛋白濃度大于3mg/mL，且碳酸鹽緩沖液與DMF的體積比例為5:1；在0℃條件下，將活化的半抗原溶液慢速滴加到蛋白溶液中，0℃條件下反應1h，然后室溫下反應24h，用PBS緩沖液透析2天，期間換液4次，即得到沙丁胺醇完全抗原。

2.根據權利要求1所述的沙丁胺醇完全抗原的合成方法，其特征在于所述載體蛋白為牛血清白蛋白BSA、匙孔血藍蛋白KLH、血藍蛋白LPH、雞卵清白蛋白OVA、人血清白蛋白HAS之一種。

3.權利要求1所述的沙丁胺醇完全抗原的應用，其特征在于：在制備沙丁胺醇抗體中的應用，所述抗體為多克隆抗體或單克隆抗體，所述抗體在檢測沙丁胺醇中的應用。