[發明專利]利用GFP蛋白檢測煙草遺傳轉化的方法

在審

• 申請號: 201410017274.1
• 申請日: 2014-01-07
• 公開（公告）號: CN103993035A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發明（設計）人: 宋雯雯;段方猛
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;C12N15/64;A01H5/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用GFP蛋白檢測煙草遺傳轉化的方法，具體操作為：將GFP蛋白的編碼基因導入目的植物中獲得轉基因植物，通過檢測轉基因植物的根、莖、葉在紫外光的激發下是否呈現綠色熒光來檢測煙草遺傳轉化，從而篩選出轉化組織；

GFP蛋白編碼基因的堿基序列如SEQ?ID?NO：1所示。

2.如權利要求1所述的利用GFP蛋白檢測煙草遺傳轉化的方法，其特征在于，具體的操作為：

將表達載體pB7WG2D采用凍融法轉化到根瘤農桿菌LBA4404中構建得到重組菌LBA4404/pB7WG2D；表達載體pB7WG2D中含有啟動子和連接在啟動子下游的GFP蛋白的編碼基因；

將制備好的重組菌LBA4404/pB7WG2D的菌液進行活化，用菌液以共培養方式浸染煙草葉盤，暗培后將葉盤移入至恢復培養基恢復培養1周后移入叢生芽誘導培養基培養，然后熒光檢測篩選轉化的叢生芽，將其切下后移入伸長培養基繼代培養，采用熒光檢測繼代培養獲得的抗性苗，將發綠色熒光的再生苗移入生根培養基培養，獲得組培植株，最后將組培植株經過馴化后，移入營養土中栽培。

3.如權利要求2所述的利用GFP蛋白檢測煙草遺傳轉化的方法，其特征在于：啟動子為花椰菜花葉病毒35S啟動子和Ubiquitin啟動子。

4.如權利要求2所述的利用GFP蛋白檢測煙草遺傳轉化的方法，其特征在于：將煙草種子用次氯酸鈉溶液消毒，用OD值在0.6～0.8之間的菌液以共培養方式浸染煙草葉盤5分鐘，暗培3天。