[發明專利]一種解淀粉芽孢桿菌及其應用

有效

• 申請號: 201410017081.6
• 申請日: 2014-01-15
• 公開（公告）號: CN103789234A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 楊利民;孫卓;韓梅;林紅梅
• 申請（專利權）人: 吉林農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/02;A01P3/00;C12R1/07
• 代理公司: 北京慶峰財智知識產權代理事務所(普通合伙) 11417
• 代理人: 劉元霞;謝蓉

1.一種解淀粉芽孢桿菌（Bacillus?amyloliquefaciens）SZ-60，其特征在于，其保藏號為CGMCC?No.8277。

2.如權利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌SZ-60，其特征在于，該菌株在牛肉膏蛋白胨（NB）培養基上單細胞繁殖生長形成的菌落不規則、乳白色、中心稍隆起、表面濕潤、半透明。鏡檢呈桿狀，大小為0.3～0.4×3.2～3.3μm，具鞭毛，G﹣，有芽孢。其能在25℃～40℃的溫度下生長，其最適生長溫度為32℃。其生長pH范圍為6.5～8.0，最適生長pH為7.2。需氧生長；硝酸鹽還原反應生成紅色化合物。接觸酶測定為陽性；脂肪酶反應為陰性；酪蛋白、酪氨酸反應呈陰性。不能利用D-葡萄糖、D-木糖。淀粉水解試驗鏡檢有糊精生成。明膠液化試驗呈陽性；檸檬酸鹽利用試驗培養基呈酸性(綠色)。V-P(pH7.0)測定生成紅色化合物；L-阿拉伯糖、甘露醇檢測呈陽性；在含有2%～5%的NaCl的牛肉膏蛋白胨（NB）培養基上均能生長。

所述的牛肉膏蛋白胨（NB）培養基的配方為：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g，瓊脂17g，水1000mL，pH6.8～7.2。

3.如權利要求1或2所述的解淀粉芽孢桿菌SZ-60在防治植物真菌病害中的應用，或在制備防治植物真菌病害的微生物制劑中的應用。

優選地，所述植物為人參。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述真菌為腐皮鐮孢菌(Fusarium?solani)、毀滅柱孢菌(Cylindrocarpon?destructans)、人參鏈格孢菌(Alternaria?panax)、立枯絲核菌(Rhizoctonia?solani)、惡疫霉菌(Phytophthora?cactorum)和人參核盤菌(Sclerotinia?schinseng)中的一種或多種。

5.一種微生物制劑，其特征在于，含有權利要求1的解淀粉芽孢桿菌SZ-60的全培養液培養物和解淀粉芽孢桿菌SZ-60的孢子。

6.如權利要求5所述的微生物制劑，其特征在于，其是通過以下制備方法制備得到的：

（1）將如權利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌SZ-60試管種接種于用1000mL三角瓶裝的300mL營養肉湯酵母膏（NBY）培養液中，在180r/min，30℃下培養36小時，獲得發酵菌液；

（2）將發酵菌液在以種子罐體積20%接種于種子罐中的發酵培養液中發酵培養，溶氧量為18～20%，攪拌速度200rpm，種子罐的溫度30～34℃，接種發酵菌液4小時后，每隔2小時對種子罐中的發酵液進行發酵質量檢測，直到發酵液菌體生長比較飽滿即將出現芽孢時，獲得發酵菌種，種子罐中的發酵時間為12～16小時；

（3）將種子罐中發酵菌種的10%接種于發酵罐中的NBY培養液中發酵培養，溶氧量為18～20%，攪拌速度200rpm，發酵罐的溫度30～34℃，接種發酵菌種4小時后，每隔2小時對發酵罐中的發酵液進行發酵質量檢測，觀察菌含量，直到發酵罐中發酵液中的最終培養物（包含菌和芽孢）生物量為10⁹cfu/ml以上、芽孢含量大于或等于90%時，立即將發酵液出罐，進行分裝，獲得SZ-60微生物制劑；發酵罐中的發酵時間為24～36小時。

優選地，所述的NBY培養液的配方為：牛肉膏3.5g，蛋白胨10.0g，酵母浸膏5.0g，麥芽浸膏10g，葡萄糖5.0g，水1000mL，pH6.8～7.2；所述的發酵培養液的配方以重量百分比計為：大豆粉2.0%，豆餅粉1.5%，淀粉0.5%，酵母浸膏0.2%，玉米漿0.2%，NaCl0.1%，Ca(HCO₃)₂0.2%，余量為水，pH7.0～7.2。

更優選地，所述的NBY培養液是這樣配制的：稱取牛肉膏、蛋白胨、酵母浸膏、麥芽浸膏、葡萄糖放入1000mL水中，充分混勻后將pH調整至6.8～7.2，1000mL三角瓶中裝量為300mL培養液，用雙層封口膜封好三角瓶口，121℃濕熱滅菌30分鐘，冷卻后備用；

所述的發酵培養液是這樣配制的：在種子罐中加入所需的水，按比例加入大豆粉、豆餅粉、淀粉、酵母浸膏、玉米漿、NaCl、Ca(HCO₃)₂，充分攪拌，將發酵培養液pH調整到7.0～7.2，密封加料孔，用高溫蒸汽滅菌2小時，冷卻后立即接種。