[發明專利]檢測胃癌的血清/血漿微小RNA標志物及其應用

有效

• 申請號: 201410016907.7
• 申請日: 2014-01-14
• 公開（公告）號: CN103773761A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 張正東;王美林;康美云;劉桑;儲海燕;仝娜;吳冬梅;趙慶洪;龔偉達
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀昌;唐循文

技術領域

本專利屬于生物技術和腫瘤學領域，涉及血清/血漿微小RNA（microRNA，簡稱miRNA）的應用，公開了一種用于檢測胃癌的血清/血漿miRNA及其應用。

背景技術

胃癌是世界最常見的腫瘤之一，雖然近年來全球范圍內胃癌的總體發病率呈下降趨勢，但其絕對發病人數仍然很龐大，發病率和死亡率分別占居惡性腫瘤的第四位和第二位。在我國，胃癌發病率和死亡率居各類腫瘤之首。每年新診患者人數達30萬多，其中三分之二為進展期胃癌，且發病年齡具有明顯的年輕化趨勢。早期胃癌多無癥狀或僅有輕微癥狀，當臨床癥狀明顯時病情已屬中晚期。胃癌的預后與分期分級密切相關。早期胃癌預后較好，術后5年存活率達90%以上；進展期胃癌的術后5年生存率只有20%～25%。然而只有7.5%的胃癌在早期被發現，所以胃癌的早期診斷是提高其存活率的關鍵和重要前提條件。

胃癌的診斷一般在臨床癥狀的基礎上，結合體征及內鏡檢查、X線鋇餐檢查、B型超聲檢查、CT檢查、磁共振成像MRI檢查和脫落細胞學檢查，但這些方法在早期診斷上都有一定的缺陷：影像學檢查對早期胃癌的診斷具有一定的局限性，內鏡檢查和脫落細胞檢查取材不當或人為經驗不足等都會導致誤診或漏診。盡管已發現一些腫瘤標志物，如癌胚抗原（CEA）和糖類抗原（如CA19-9、CA74-2等）等，但對胃癌診斷的敏感度和特異度均有限，尤其在發現早期胃癌和鑒別侵襲性無痛性腫瘤方面(Madhavan?et?al.，2013)。因此，尋找新的特異性高和敏感性好的胃癌標志物越來越受到國內外的重視。

微小RNA（microRNA，miRNA）是一類長約20～25個核苷酸的非編碼RNA，它參與腫瘤細胞的生物調控過程，在腫瘤的發生、發展過程中間接發揮著癌基因或者抑癌基因樣作用。miRNA通過與靶mRNA的3’端非翻譯區序列完全或部分互補結合，導致靶mRNA降解或轉錄后翻譯抑制，從而調控靶基因的表達。

基因表達譜芯片開創了腫瘤miRNA表達譜研究的新領域。研究發現，miRNA在組織中的表達表現為顯著的腫瘤相關性、組織特異性和表達穩定性，以此能更精確地進行組織和腫瘤類型的分類。miRNA的研究已經從傳統的腫瘤分子機制的研究發展到臨床應用的領域。13個基因芯片技術和生物信息學的研究發現了139個在胃癌組織及相應癌旁或正常組織中差異表達的miRNAs，其中有29個miRNAs在不同的研究中獲得了一致的結果(Wang?et?al.，2012)。這些miRNAs可作為潛在的胃癌診斷生物標志物。但臨床上大多胃癌癥狀出現時已屬中晚期，無法實現腫瘤的早期診斷，而且組織樣本取材具有創傷性，在臨床上的應用存在一定的局限性。

研究發現，血清/血漿miRNA非常穩定，反復凍融、酸堿環境、煮沸、長期保存等均不會造成血清/血漿miRNA的損失，而且miRNA在外周血中的表達同樣具有腫瘤相關性和組織特異性。循環miRNA檢測損傷性小、靈敏度高、可重復性好、費用低，已有很多關于血清/血漿miRNA用于腫瘤早期檢測和預后生物標志物的報道(Avila-Moreno?et?al.，2011;Qu?et?al.，2011;Cortez?et?al.，2012)，其作為腫瘤標志物具有良好的臨床應用前景。近年來，已有研究發現了一些在胃癌患者血清/血漿中異常表達的miRNAs，提出這些血清/血漿miRNA可以作為一種非侵襲性的胃癌生物標志物(Liu?et?al.，2011;Song?et?al.，2012;Gorur?et?al.，2013;Li?et?al.，2013)。這些miRNAs在血清/血漿中表達情況與在胃癌組織中的表達情況是否一致，是否能以此作為胃癌的特異性標志物用于胃癌的診斷還有待進一步研究。

發明內容

解決的技術問題：本發明的目的在于針對血清/血漿miRNA表達與組織miRNA表達是否一致的問題，通過基因表達譜芯片在胃癌及相應的癌旁組織中篩選出差異表達的miRNAs，同時在胃癌患者血清/血漿及年齡性別匹配的正常對照血清/血漿中篩選出差異表達的miRNAs，然后找出組織和血清/血漿中共同上調或下調的miRNAs，作為胃癌患者血清/血漿miRNA標志物，為臨床上胃癌患者的早期發現及早期治療提供支持。

技術方案：檢測胃癌的血清/血漿微小RNA標志物，所述生物標志物為：miR-148a、miR-142、miR-26a和miR-195中的一種或任意幾種，所述miR-148a如SEQ?ID?NO:1所示，miR-142如SEQ?ID?NO:2所示，miR-26a如SEQ?ID?NO:3所示，miR-195如SEQ?ID?NO:4所示。