[發明專利]調控陸地棉兩類主要莖桿表皮毛類型的等位基因及用于其鑒定的SSCP分子標記有效
| 申請號： | 201410016602.6 | 申請日： | 2014-01-14 |
| 公開（公告）號： | CN103757030A | 公開（公告）日： | 2014-04-30 |
| 發明（設計）人： | 戎均康;何沙娥;丁明全;李飛飛;周偉;曹躍芬 | 申請（專利權）人： | 浙江農林大學 |
| 主分類號： | C12N15/29 | 分類號： | C12N15/29;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 湯東鳳 |
| 地址： | 311300 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 調控 陸地棉 主要 表皮 類型 等位基因 用于 鑒定 sscp 分子 標記 | ||
【權利要求書】：
1.調控陸地棉兩類主要莖桿表皮毛類型的A組GhHD1等位基因，其特征在于，GhHD1a的核苷酸序列如SEQ:ID:1所示，GhHD1b的核苷酸序列如SEQ:ID:2所示。
2.一種鑒定陸地棉兩類主要莖桿表皮毛類型和篩選權利要求1所述兩個等位基因的SSCP標記方法，包括以下步驟：
（1）選取莖桿表皮毛有差異的陸地棉品種；
（2）利用CTAB法提取這些陸地棉葉片的基因組DNA；
（3）根據不同陸地棉品種A染色體組GhHD1基因At-GhHD1序列差異，設計6對At-GhHD基因引物，進行PCR擴增；
（4）PCR產物通過瓊脂糖電泳檢測濃度，取100ng量的產物加入固定變性劑5ul，98℃變性10min，冰浴10min，制作聚丙烯酰胺凝膠，上樣，0-4℃電泳，180v，12h；
（5）固定、銀染顯色，讀帶分型；
（6）找到一個特異的SSCP分子標記，命名為GHHD1-TRI，用于區分A1和A2兩種基因型；
（7）目測和解剖鏡觀察A1和A2類型的莖桿表皮毛；
（8）分析GHHD1-TRI分子標記的SSCP條帶和莖稈表皮毛表型。
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