[發(fā)明專利]納米模擬酶免疫層析檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410015610.9
• 申請日: 2014-01-14
• 公開（公告）號: CN103808926A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 閻錫蘊(yùn);段德民;張德璽;楊東玲;馮靜;宋麗娜
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院生物物理研究所
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 王旭

1.一種用于檢測液體樣品中的待測物的納米模擬酶免疫層析檢測方法，所述方法依次包括以下步驟：

1)提供檢測探針，所述檢測探針通過將磁性納米顆粒與能夠與所述待測物特異性結(jié)合的第一分子偶聯(lián)制備；

2)提供捕獲探針，所述捕獲探針是固定化的能夠與所述待測物特異性結(jié)合的第二分子；

3)使所述液體樣品與所述檢測探針接觸；

4)使與所述檢測探針接觸過的所述液體樣品與所述捕獲探針接觸；以及

5)向經(jīng)過步驟4)的所述捕獲探針中加入供氫底物和過氧化物進(jìn)行顯色反應(yīng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述磁性納米顆粒的粒徑在10納米至500納米范圍內(nèi)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述磁性納米顆粒是Fe₃O₄磁性納米顆粒。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述待測物是蛋白質(zhì)、多肽或核酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述待測物是蛋白質(zhì)，并且所述第一分子和所述第二分子是針對所述蛋白質(zhì)的特異性抗體，優(yōu)選是單克隆抗體。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述第一分子與所述磁性納米顆粒通過EDC-NHS法偶聯(lián)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述供氫底物包括四甲基聯(lián)苯胺(TMB)、四甲基聯(lián)苯胺硫酸鹽(TMBS)、鄰苯二胺(OPD)、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)、二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸(DAB-4HCl)、5-氨基水楊酸(5-AS)、鄰聯(lián)甲苯胺(OT)或連氮二銨鹽(ABTS)。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述過氧化物包括過氧化氫和過氧化脲。

9.一種用于檢測液體樣品中的待測物的納米模擬酶免疫層析檢測裝置，所述裝置包括依次設(shè)置在底板上的以下各項：

樣品墊，所述樣品墊用于承接所述液體樣品并濾過所述樣品中的雜質(zhì)；

磁性納米顆粒墊，所述磁性納米顆粒墊包含與能夠與所述待測物特異性結(jié)合的第一分子偶聯(lián)的磁性納米顆粒；

檢測線，所述檢測線包含能夠與所述待測物特異性結(jié)合的第二分子；

吸收墊，所述吸收墊由吸水材料制成，用于提供層析的動力，

其中所述磁性納米顆粒的粒徑優(yōu)選在10納米至500納米范圍內(nèi)，

其中所述磁性納米顆粒優(yōu)選是Fe₃O₄磁性納米顆粒，

其中所述待測物優(yōu)選是蛋白質(zhì)、多肽或核酸，并且更優(yōu)選地，所述待測物是蛋白質(zhì)而所述第一分子和所述第二分子是針對所述蛋白質(zhì)的特異性抗體，優(yōu)選是單克隆抗體，

其中所述第一分子與所述磁性納米顆粒優(yōu)選通過EDC-NHS法偶聯(lián)，

其中所述供氫底物優(yōu)選包括四甲基聯(lián)苯胺(TMB)、四甲基聯(lián)苯胺硫酸鹽(TMBS)、鄰苯二胺(OPD)、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)、二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸(DAB-4HCl)、5-氨基水楊酸(5-AS)、鄰聯(lián)甲苯胺(OT)或連氮二銨鹽(ABTS)，并且

其中所述過氧化物優(yōu)選包括過氧化氫和過氧化脲。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測裝置，其中在所述檢測線之后還設(shè)置有質(zhì)控線，所述質(zhì)控線固定有能夠與所述第一分子特異性結(jié)合的第三分子。