[發明專利]黃曲霉毒素B1的核酸適體AFB1-22及其應用

有效

• 申請號: 201410015428.3
• 申請日: 2014-01-14
• 公開（公告）號: CN103710347A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 楊朝勇;朱玲;鄒遠;劉如迪;朱志;莊峙廈
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/53
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發明涉及一種核酸，特別是涉及黃曲霉毒素B₁的核酸適體AFB₁-22及其應用。

背景技術

在糧油食品的生物性污染問題中，真菌毒素的污染是最主要的因素之一，而黃曲霉毒素（Aflatoxins，AF）是迄今發現的毒性和致癌性最強的天然污染物。黃曲霉毒素是由黃曲霉菌和寄生曲霉菌等產生的一組化學結構類似的次生代謝產物，具有二呋喃環和氧雜萘鄰酮（香豆素）的基本結構，目前已發現20多種，主要包括B₁、B₂、G₁、G₂、M₁和M₂等。其中，AFB₁的毒性最強，存在量最大，穩定性也最高，其毒性為氰化鉀的10倍、砒霜的68倍，主要作用于肝臟等器官，可誘發原發性肝癌、胃癌和肺癌等，并于1993年被世界衛生組織癌癥研究機構劃定為一類致癌物。AFB₁廣泛存在于土壤和動植物中，尤其是植物性食物，如花生、玉米、大米、小麥、牛奶和各種堅果等。AFB₁的理化性質比較穩定，脂溶性，耐熱，難以去毒，對人和動物的健康產生極大的危害。AFB₁含量是國際食品衛生和農產品貿易中的必檢指標，許多國家均制定了其在食品中允許量的國家標準。因此，對AFB₁開展有效、快速、高靈敏檢測具有重要的意義。（1.Wogan,G.N.Chemical?nature?and?biological?effects?of?the?aflatoxins.Bacteriol?Rev1966,30,460-470;2.Shankaran,R.;Raj,H.G.;Venkitasubramanian,T.A.Biochemical?changes?in?liver?due?to?aflatoxin.Br?J?Exp?Pathol1970,51,487-491）。

目前，常用的AFB₁檢測方法概況起來主要有化學分析法和免疫分析法。化學分析法主要有薄層層析色譜法（TLC）、高效液相色譜法（HPLC）和微柱法等，這些常規檢測方法具備了較高的檢測靈敏度和準確度，但存在繁雜的樣品前處理、分離檢測耗時、儀器設備昂貴笨重而難以實現現場快速分析、需要專業技術人員等缺點。免疫分析法主要是基于抗黃曲霉毒素單克隆抗體的高親和力和高特異性發展的一系列免疫學檢測方法，其中的酶聯免疫吸附法（ELISA）靈敏度高、安全性好、干擾少，操作簡便快速，是目前最普遍實用的AFB₁的檢測方法。但AFB₁是一種劇毒小分子，其抗體的制備存在較大困難，試劑壽命較短難保存，批間差異也較大等，這些瓶頸限制了免疫學檢測方法的應用范圍和快速發展（3.Jin?Hwan?Do;Dong-Kug?Choi.Aflatoxins:Detection,Toxicity,and?Biosynthesis.Biotechnology?and?Bioprocess?Engineering2007,12,585-593;4.Liu?Z.;Gao?J..Advances?in?research?on?detection?methods?for?aflatoxins.Journal?of?Anhui?Agricultural?University2004,31,223-226）。因此，面向AFB₁的新型檢測試劑和檢測方法亟待發展。