[發明專利]抗蟲棉花植物及其鑒定方法

有效

• 申請號: 201410015366.6
• 申請日: 2008-03-31
• 公開（公告）號: CN103710312A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: L·特落林德爾;S·莫昂;D·佩林克;V·哈貝克斯;H·范赫克
• 申請（專利權）人: 拜爾作物科學公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;A01H1/02;A01H5/00
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 柴云峰;黃革生

本申請是申請日為2008年3月31日、發明名稱為“抗蟲棉花植物及其鑒定方法”的中國專利申請200880010892.6(國際申請號PCT/EP2008/002667)的分案申請。

發明領域

本發明涉及轉基因棉花植物，植物材料及種子，其特征在于包含一個特定的轉化事件，特別是在棉花基因組的特定部位存在編碼可賦予昆蟲抗性的蛋白的基因。本發明的棉花植物組合了昆蟲抗性表型、農學性狀、遺傳穩定性、以及對不同遺傳背景的適應性（等同于非轉化棉花系在無昆蟲狀況下）。本發明進一步提供了在生物樣品中鑒定特別包含了轉化事件EF-GH5的植物材料的存在的方法和試劑盒。

發明背景

植物中轉基因的表型表達取決于：基因本身的結構，以及其在植物基因組中的位置。同時，在基因組的不同位置轉基因（外源DNA中）的存在將以不同的方式影響植物的整體表型。通過遺傳操作，在農學上或工業上成功地將商業上感興趣的性狀引入到植物中是一個長期的過程，這取決于不同的因素。轉基因植物的實際轉化和再生僅僅是一系列選擇步驟的第一步，選擇步驟包括廣泛的遺傳表征，育種，田間試驗評價，最終實現優良品系的選擇。

棉纖維是全世界最重要的紡織原料。每年全球收獲大約80,000,000英畝棉花。就面積產量而言，棉花是美國第五大作物，2000年其種植超過了15,000,000英畝。

靠棉花為生的最具破壞性的昆蟲物種有：Helicoverpa?zea（玉米果穗螟蛉或棉鈴蟲）、Helicoverpa?armigera(美洲棉鈴蟲)、Heliothis?virescens(煙青蟲)及Helicoverpa?punctigera。

鑒于對新型食品和新型飼料的關注，GMO和非GMO產品的分開，以及對專利材料的鑒別，優良事件的明確鑒定正變得愈加重要。理想的是，該鑒定方法既快又簡單，還不需要大量的實驗室設備。此外，該方法應提供不需專家解釋就能使優良事件明確確定的結果，但是如果必要的話，在專家仔細審查下，結果被證明有效。本文描述了在生物樣品中鑒定優良事件EF-GH5而用到的特定工具。

在開發抗蟲棉(Gossypium?hirsutum)過程中，從轉基因棉花植物群體中將EE-GH5鑒定作為優良事件，它包含編碼來自蘇云金芽孢桿菌（Bacillus?thuringiensis）的殺蟲晶體蛋白的基因。轉基因棉花植物包含編碼Bt殺蟲晶體蛋白（如WO03/093484所述）的嵌合基因，其處于植物可表達啟動子的控制之下。

包含抗蟲基因的棉花植物已經在本領域中公開。但是，并沒有任何現有技術公開內容教導或提示了本發明。

發明概述

本發明涉及轉基因棉花植物、或其種子、細胞或組織，其包含穩定整合在其基因組中的表達盒，該表達盒包含一個包含cry1Ab基因編碼序列的抗蟲基因（如本文實施例1.1所述），其為抗蟲的，在無昆蟲壓力下，該轉基因植物及其材料具有與非轉基因的等基因系基本上等同的農學性能。在有昆蟲壓力下，該轉基因植物將具有比非轉基因植物優越的農學表型。

根據本發明，棉花植物、或其種子、細胞或組織包含優良事件EE-GH5。

更確切地說，本發明涉及轉基因棉花植物、其種子、細胞或組織，其基因組DNA的特征在于，當用本文所述的PCR鑒定方法分析，使用兩個分別針對EE-GH5的5‘或3‘側翼區和外源DNA的引物時，得到特異于EE-GH5的片段。所述引物可以分別針對SEQ?ID?No：1的5‘側翼區和外源DNA內，例如可以分別包含SEQ?ID?No：7和SEQ?ID?No：8的核苷酸序列或由其組成，得到100-700bp的DNA片段，優選大約129bp。該引物也可以分別針對SEQ?ID?No：2內的3‘側翼區和外源DNA，例如可以分別包含SEQ?ID?No：3和SEQ?ID?No：6的核苷酸序列或由其組成，得到300-700bp的DNA片段，優選是大約369bp。