[發明專利]抗洪湖碘泡蟲極絲蛋白的單克隆抗體及其應用

無效

• 申請號: 201410015221.6
• 申請日: 2014-01-14
• 公開（公告）號: CN103880954A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 顧澤茂;賈洛;柳陽;翟艷花;袁軍法;秦建華;李丹;郭慶祥
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C07K16/20
• 分類號: C07K16/20;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/569;C12R1/91
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 徐紹新

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種抗洪湖碘泡蟲極絲蛋白的單克隆抗體及其應用。?

背景技術

粘孢子蟲（myxosporea）是一類主要感染魚類的后生動物寄生蟲，能導致養殖魚類發生重大病害。異育銀鯽（Carassius?auratus?gibelio(Bloch)）是我國重要的淡水養殖魚類，也是粘孢子蟲的主要宿主之一，至今已在其不同組織和器官中發現30多種粘孢子蟲，大部分種類對異育銀鯽并不直接造成危害，但少數種類，如洪湖碘泡蟲（Myxobolus?honghuensis?Liu?et?Gu，2012）、吳李碘泡蟲（Myxobolus?wulii）、丑陋圓形碘泡蟲（Myxobolus?turpisrotundus?Zhang,2009）、武漢單極蟲（Thelohanellus?wuhanensis?Xiao?et?Chen,1993）、龜殼單極蟲（Thelohanellus?testudineus?Liu?et?Gu，2012）等均能直接危害養殖魚類。?

然而，不同種類的粘孢子蟲對魚體造成的危害是不一致的，如洪湖碘泡蟲引起的“喉孢子蟲病”導致魚種的死亡率超過90%；丑陋圓形碘泡蟲成熟胞囊位于口腔、咽腔等部位，主要造成機械損傷和阻塞，導致魚體消瘦并影響經濟價值；部分種類還會形成混合感染。由于不同種類粘孢子蟲的感染機制和對魚體造成的危害程度不一致，因而對其病害所采取的防控措施也是不一樣的，故對病害必須做到準確診斷。?

快速和準確鑒定病原種類是有效開展不同粘孢子蟲病害防治的關鍵。但是，目前最廣泛應用的物種鑒定方法是依據形態學和分子生物學進行，由于粘孢子蟲形態特征相對簡單，同屬之間的種類難以區分，其準確性主要取決于鏡檢設備和鏡檢人員的技術和經驗；分子生物學敏感性高，但需獲得較多物種的分子序列進行比較，且操作復雜、必須在專門實驗室才能完成。遺憾的是，這些條件在養殖現場或基層服務站通常得不到滿足，導致檢測結果可信度下降。?

極絲是粘孢子蟲的重要結構，其圈數也是粘孢子蟲形態分類的重要參數之一。研究發現，極絲是粘孢子蟲的遺傳物質，種的特異性很強。在粘孢子蟲成熟后，極絲從成熟孢子的極孔中釋放出來，粘附于中間宿主，進入其體內發育成放射孢子蟲（actinosporean）。放射孢子蟲具有同樣的極絲結構，在其感染魚類宿主時，極絲釋放出來粘附于魚體表皮組織器官（鰓、鰭條、皮膚等），而后進入魚體內，經過移行與發育形成成熟孢子。章晉勇等（2008）研究發?現丑陋圓形碘泡蟲的極絲具有較好免疫原性，但種特異性很強。對于嚴重危害我國異育銀鯽的洪湖碘泡蟲，生產實踐中尚缺乏快速和準確的物種鑒定技術，這嚴重阻礙了喉孢子蟲病防控策略的制定。因此，急需發展快速、準確、靈敏的洪湖碘泡蟲的物種快速診斷技術，為“喉孢子蟲病”的早期診斷和防治提供重要依據，保障異育銀鯽養殖業的健康發展。?

發明內容

本發明的第一個目的就是針對以上存在的問題與不足，提供一種抗洪湖碘泡蟲極絲蛋白的單克隆抗體。?

本發明的第二個目的是提供能分泌所述單克隆抗體的雜交瘤細胞株。?

本發明的第三個目的是提供所述單克隆抗體的制備方法。?

本發明的第四個目的是提供所述單克隆抗體的應用。?

為了解決上述目的，在本發明的第一方面，提供了一種抗洪湖碘泡蟲極絲蛋白的單克隆抗體，該單克隆抗體對洪湖碘泡蟲極絲蛋白有特異性。?

本發明中所述的“特異性”是指單克隆抗體對相應抗原或近似抗原物質的識別能力，特異性高，抗原的識別能力就強。因此，上述的單克隆抗體能夠特異性識別和結合洪湖碘泡蟲極絲蛋白。?

所述單克隆抗體由保藏號為CCTCC?NO:C2013188的雜交瘤細胞株1C7分泌。所述雜交瘤細胞株1C7已保藏在位于湖北省武漢市武漢大學內的中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，保藏日期：2013年11月15日，分類命名為雜交瘤細胞株1C7。?

所述雜交瘤細胞株1C7是采用洪湖碘泡蟲可溶性蛋白作為抗原免疫小鼠得到的，該可溶性蛋白的SDS-PAGE分析如附圖1所示。?

所述可溶性蛋白免疫小鼠，取小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞融合，篩選出能夠分泌對洪湖碘泡蟲極絲蛋白有特異性反應的單克隆抗體的雜交瘤細胞株1C7，從所述雜交瘤細胞株1C7的培養上清液中或從注射所述雜交瘤細胞后的動物腹水中獲取所述單克隆抗體。?