[發明專利]一種天然哺乳動物尿酸酶制備方法

有效

• 申請號: 201410015218.4
• 申請日: 2014-01-10
• 公開（公告）號: CN103756983A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 張淳;范開;馮尚彩;劉兆明
• 申請（專利權）人: 臨沂大學
• 主分類號: C12N9/06
• 分類號: C12N9/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種天然哺乳動物尿酸酶制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

1)預處理：將新鮮哺乳動物肝臟均質破碎后，用pH值介于7.2-8.8之間的緩沖液洗滌，洗滌沉淀用pH值介于9.7-10.5之間的緩沖液溶解，得尿酸酶初提液；

2)粗純化：將上述初提液進行硫酸銨分級沉淀，復溶緩沖液溶解，復溶液進行陰離子交換層析純化，得尿酸酶粗純品溶液；

3)精純化：將上述尿酸酶粗純品溶液進行親和層析純化，得尿酸酶純品溶液。

2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述的哺乳動物為小鼠、大鼠、豬、犬、羊或兔。

3.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟1)預處理所述洗滌緩沖液包括磷酸鹽緩沖液和三羥甲基氨酸甲烷-鹽酸緩沖液；洗滌緩沖液濃度介于10mM-0.2M之間；以體積質量比mL.g計，洗滌緩沖液與動物肝臟的混合比例介于5∶1-20∶1之間。

4.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟1)預處理所述溶解緩沖液為碳酸鹽緩沖液；溶解緩沖液濃度介于50mM-0.2M之間；以體積質量比mL：g計，溶解緩沖液與動物肝臟洗滌后沉淀的混合比例介于50∶1-200∶1之間。

5.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟2)粗純化所述沉淀尿酸酶蛋白的硫酸銨飽和度介于5.0％-15.0％之間。

6.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟2)粗純化所述尿酸酶蛋白復溶緩沖液與預處理所述溶解緩沖液相同；復溶緩沖液體積為尿酸酶初提液體積的20％-50％。

7.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟2)粗純化所述陰離子交換層析純化介質為偶聯二乙基(2-羥丙基)氨基乙基或二乙氨基乙基基團的瓊脂糖系列離子交換介質。

8.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟2)粗純化所述陰離子交換層析純化包含下述步驟：待陰離子交換層析柱用復溶緩沖液平衡后，將硫酸銨沉淀復溶樣品進行上樣，復溶緩沖液復平衡后，用含0.1M-0.3M氯化鈉的復溶緩沖液洗脫，收集洗脫樣品。

9.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟3)精純化所述親和層析純化包含下述步驟：待黃嘌呤親和層析柱用復溶緩沖液平衡后，將尿酸酶粗純品樣品進行上樣，復溶緩沖液復平衡后，用含0.05mM-0.2mM黃嘌呤的復溶緩沖液洗脫，收集洗脫樣品。

10.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟3)精純化所述尿酸酶精純品，其純度測定方法為常規還原型十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳或全梯度反相-高效液相色譜測定。