[發明專利]一種應用于鮑魚、海參養殖的地衣芽孢桿菌微生態制劑

在審

• 申請號: 201410014886.5
• 申請日: 2014-01-03
• 公開（公告）號: CN103845365A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發明（設計）人: 崔云龍
• 申請（專利權）人: 青島東海藥業有限公司
• 主分類號: A61K35/74
• 分類號: A61K35/74;A61P39/00;A61P37/04;A23K1/16;A23K1/18;C02F3/34;C12N1/20
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技術領域

本發明涉及一種應用于鮑魚、海參養殖的制劑，具體是由地衣芽孢桿菌制成的制劑在促進鮑魚、海參的生長，提高鮑魚、海參免疫力，防治鮑魚、海參疾病，提高飼料轉化率或凈化養殖水質中的應用。

背景技術

2006年底在全國爆發的大菱鲆藥殘事件給我們敲響了警鐘。歐盟已于2006年全面禁止抗菌藥作為飼料添加劑在養殖中的應用。為保證食品安全，美國等發達國家對肉類、海產品等抗菌藥殘留進行檢測。隨著中國加入世貿組織，名優產品出口被普遍看好。但由于國內養殖不科學使用抗生素等有害藥物的現象嚴重，大大限制了產品的出口。開發抗菌藥替代產品應用于養殖業是目前市場所需要的。

發明內容

本發明的目的是提供一種促進鮑魚、海參的生長，提高鮑魚、海參免疫力，防治鮑魚、海參疾病，提高飼料轉化率或凈化養殖水質的制劑，該制劑由地衣芽孢桿菌制成。

本發明制劑的制備優選是通過下述步驟實施的，但不局限于此制備工藝，公知的能實現的制備工藝均可以：采取含地衣芽孢桿菌的樣品，然后將樣品置于滅菌瓶內，4℃保存，研究時從中取一定量樣品加入18mL滅菌的稀釋液中，充分混勻，在無菌操作臺內，進行10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，10^-5，10^-6，10^-7梯度稀釋，取10^-5，10^-6，10^-7三個稀釋梯度，分別涂布于地衣芽孢桿菌選擇性單菌落分離固體培養基上，置于培養箱內，30℃下培養48小時，選擇長勢良好的單菌落分別接種于地衣芽孢桿菌液體擴增培養基中，置于培養箱內，30℃下擴增培養48小時。將所得培養液離心(12000rpm)分離出菌體后，將菌體冷凍真空干燥，調制出各菌種的干燥菌粉，然后根據《伯杰細菌鑒定手冊》、相關細菌鑒定文獻或16S?rRNA序列對比分析進行地衣芽孢桿菌菌種鑒定和毒性試驗，將無毒性的地衣芽孢桿菌干燥菌粉按需要比例添加粘合劑、沸石粉等輔料制成顆粒劑、片劑、膠囊、散劑、粉劑或液體制劑等各種劑型，或制成獸藥、飼料添加劑或水質凈化劑，也可加入其他活菌或低聚果糖等低聚糖起到協同作用。

地衣芽孢桿菌選擇性單菌落分離固體培養基優選但不局限于：純化水1L，蛋白胨10.0g，牛肉浸膏3.0g，NaCl5.0g，瓊脂25.0g，調pH7.2，121℃，滅菌15分鐘。

地衣芽孢桿菌液體擴增培養基優選但不局限于：純化水1L，蛋白胨5.0g，酵母粉1.0g，檸檬酸鐵0.1g，氯化鈉19.45g，氯化鎂5.98g，硫酸鈉3.24g，氯化鈣1.8g，氯化鉀0.55g，碳酸鈉0.16g，溴化鉀0.08g，氯化鍶0.034g，硼酸0.022g，硅酸鈉0.004g，氟化鈉0.0024g，硝酸鈉0.0016g，磷酸氫二0.008g，調pH7.4，121℃，滅菌15分鐘。

為進一步具體說明本發明，發明人利用上述方法通過地衣芽孢桿菌選擇性單菌落分離固體培養基分離鑒定出了無毒性的地衣芽孢桿菌，本發明所述地衣芽孢桿菌并不局限于為說明本發明所述的地衣芽孢桿菌，只要無毒性的地衣芽孢桿菌均是本發明所述，均在本發明的保護范圍內。

本發明所述地衣芽孢桿菌優選但不限于地衣芽孢桿菌DHH21保藏編號CGMCC8563，地衣芽孢桿菌DHH09保藏編號CGMCC8567。

本發明實施說明中優選使用的地衣芽孢桿菌的細菌學性質，本發明并不局限本發明所述細菌學性質，只是為說明本發明的優選：

1、為說明本發明，本發明利用上述方法分離的地衣芽孢桿菌分別為地衣芽孢桿菌DHH21保藏編號CGMCC8563，地衣芽孢桿菌DHH09保藏編號CGMCC8567。

2、菌體或菌落形態

顯微鏡觀察：菌體長1.5-3微米，寬0.6-0.8微米，革蘭氏染色陽性，芽孢呈橢圓型或柱狀，中生或偏中生。

平板形態：菌落不透明、白色、濕潤有光澤。

3、生理生化鑒定

吲哚：-；明膠液化：+；硝酸鹽還原：+；卵黃反應：-；V-P試驗：+。

4、糖酵解實驗鑒定

阿拉伯糖：+；葡萄糖：+；木糖：+；甘露糖：+。

本發明所述的地衣芽孢桿菌指活生物個體。