[發明專利]一種用THRSP基因預示秦川牛肌肉嫩度和系水力的分子標記方法

無效

• 申請號: 201410014627.2
• 申請日: 2014-01-13
• 公開（公告）號: CN103740830A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 王洪寶;昝林森;張小白;張鶯鶯
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 大慶市建華專利事務所 23119
• 代理人: 孫薇

技術領域

本發明屬于動物分子生物學與基因工程領域，涉及一種用THRSP基因預示秦川牛肌肉嫩度和系水力的分子標記方法。

背景技術

秦川牛具有體軀高大、役用能力強、肉用性能好、遺傳穩定、適應性好等優點。它的起源可追溯到公元前的8000～6000年的新石器時代，其野生祖先可能就是短角型的亞洲原牛。秦川牛的形成，與長期飼喂具有“牧草之王”美稱的紫花苜蓿有重要關系。目前，陜西關中地區秦川牛及其改良牛的飼養量約150萬頭左右，對當地農業生產的發展和農村經濟的繁榮具有重要的促進作用。近年來，秦川牛數量和質量都有了大幅度的提高。尤其是實施《省標》和《國標》以來，秦川牛的體質外貌發生了明顯變化，體格普遍增大，膘肥體壯，結構勻稱，紫紅及紅色被毛顯著增加，但是，秦川牛還存在著生長較慢，肌肉脂肪沉積能力較差、母牛乳房發育較差，產奶量不高等缺陷。秦川牛的發展方向應堅持本品種選育，保留原有風味特點，改善肉質、糾正尻部尖斜等缺點，提高產肉性能，向肉用方向發展。本品種選育，并不是單純的保持原種的一切特征特性，不管它有沒有缺點，而是在保留其固有優點的基礎上，糾正其缺點，使之更上一層樓，成為經濟價值較高的品種。

肉質性狀是評價黃牛品種優劣和生產性能高低的重要指標，而且關于牛品質的研究已經目前世界范圍肉牛育種工作者的重點和熱點內容。在長期的選育過程中，隨著秦川牛從役用到肉役兼用，直至育成最終的肉用品種，秦川牛的肉用性能正逐步得到改善。利用分子生物學技術，對影響肉質性狀的基因進行多態性研究，目的在于探索該基因對肉牛肉質性狀的影響，找到可用于肉質性狀分子標記輔助選擇的有效基因，為我國地方良種黃牛的肉用改良提供一定的理論依據。

THRSP基因，即甲狀腺激素應答蛋白Spot14(thyroid?hormone?responsive?Spot14，THRSP)是在研究甲狀腺素在脂肪組織中的反應時被發現。THRSP基因主要在脂肪生成組織如肝臟、腹脂和乳腺內表達。由于該蛋白對甲狀腺素的刺激和高葡萄糖水平產生應答反應，而且該基因所在的染色體區域與肥胖癥有關，因此被認為對脂肪生成具有重要的作用。人上的研究結果表明，THRSP基因定位在與肥胖有關的染色體區域，Zhu等研究發現，小鼠THRSP敲除后，其乳中甘油三脂的含量顯著減少，主要是由于乳腺脂類物質從頭合成速率降低所致，具體表現為甘油三酯池中的中鏈脂肪酸含量明顯減少，Cogburn等2003年詳述了雞肝臟代謝途徑，揭示脂肪生成途徑中的FAS、LFABP、C/EBPa等主要酶的表達量隨THRSP表達的增強而提高，且THRSP對哺乳動物和雞肝臟脂肪生成酶的激活機制可能相同。牛的THRSP基因位于第29號染色體上，包含兩個外顯子，一個內含子，且只有第一外顯子編碼蛋白。

鑒于此，可以考慮將THRSP基因作為候選基因，研究其預示和檢測中國黃牛宰前活重、胴體重、胴體長、背膘厚、眼肌面積、系水力、大理石花紋、嫩度等肉質性狀的方法，為我國黃牛的肉質改良提供了理論依據。

發明內容

本發明的目的是提供一種用THRSP基因預示秦川牛肌肉嫩度和系水力的分子標記方法，采用PCR-SSCP技術相結合，通過變異位點基因型的分析、比較，從而預測和確定該牛的肉質優劣。

本發明通過以下技術方案來實現：一種用THRSP基因預示秦川牛肌肉嫩度和系水力的分子標記方法，該方法包括以下步驟：

（1）秦川牛全血基因組DNA的獲??；

（2）根據牛THRSP基因序列設計一對引物THRSP-F和THRSP-R，其中：

THRSP-F：5’-3’：CGCCTCCGATCTCTACAACT（SEQ?ID?No.1）

THRSP-R：5’-3’：CCAGCTTCAGTCTCAGCTCC（SEQ?ID?No.2）

（3）利用該對引物對秦川牛全血基因組DNA進行PCR擴增；

（4）所得的PCR產物進行SSCP帶型檢測。

步驟（4）中的SSCP帶型分為AA、AB和BB三種，AA型預示秦川牛肌肉嫩度顯著高于AB型，BB型預示秦川牛肌肉系水力顯著高于AB型，秦川牛宰前活重、胴體重、背膘厚、眼肌面積、系水力大小變化為BB>AA>AB。

所述的AA帶型表示的核苷酸序列如SEQ?ID?No.3所示。

所述的BB帶型表示的核苷酸序列的突變位點為C→T突變，位于第一外顯子184bp處。