[發(fā)明專(zhuān)利]一種嗜冷孟氏假單胞菌及其應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410014205.5
• 申請(qǐng)日: 2014-01-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103865838A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李榮鵬;胡南;吳紅燕
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南京工業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/20;C12P7/62;C12R1/38
• 代理公司: 南京蘇高專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 沈振濤

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物領(lǐng)域，特別涉及一種嗜冷孟氏假單胞菌，還涉及該菌株的應(yīng)用。

背景技術(shù)

聚羥基脂肪酸脂（PHAs）是由單體羥基脂肪酸酯構(gòu)成的可降解聚合物，它能被許多微生物合成。許多細(xì)菌用PHA作為碳源的儲(chǔ)備物來(lái)避免營(yíng)養(yǎng)的不足，包括氮、磷、鎂元素(Dowes?and?Senior,1973)。同時(shí)，PHA能被細(xì)菌和古生菌合成(Steinuchel?and?Byrom,1991)，研究較多的有產(chǎn)堿桿菌屬(Alcaligene?sp.)(Linko?et?al.,1993)、固氮菌屬(Azotobacter?sp.)(Page,1992)、芽孢桿菌屬（Bacillus?sp.）(Huang?and?Reusch,1996)、紅假單胞菌屬（Rhodopseudomonas?sp.）(Yue?et?al.,2007)和假單胞菌屬(Pseudomonas?sp.)(Kimura?et?al.,1992)。

聚羥基丁酸酯（PHB）是最簡(jiǎn)單的PHA聚合物，擁有可降解性、質(zhì)量輕、熱塑性和抗磨損性的優(yōu)點(diǎn)(Steinbuchel?and?Valeniin,1995)，PHB在被用作為可降解塑料、醫(yī)用移植材料和優(yōu)質(zhì)化學(xué)品方面有很大的潛能。

由于嗜冷菌在相對(duì)較低溫度下的高效、多樣的生物合成能力，這些微生物給生物技術(shù)提供了重要的資源(Moyer?and?Morita,2007)。從極地緯度帶獲得的土樣中有豐富的嗜冷菌，例如Jiang等人（2008）從阿拉斯加土樣中首次分離得到了熒光假單胞菌，又如在南極洲的一個(gè)臨時(shí)的池塘中分離得到了P.Extremaustralis?sp.nov.strain14-3^T。這兩種嗜冷菌能在低溫下積累PHB。然而，現(xiàn)有菌種即使長(zhǎng)時(shí)間發(fā)酵后PHB產(chǎn)量也很少，因此，PHB的生物合成比標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)合成更昂貴，這也就限制了生物合成PHB的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：本發(fā)明的目的在于提供一種在低溫下能高產(chǎn)PHB的嗜冷孟氏假單胞菌。

本發(fā)明的第二目的是提供上述菌種在制備聚羥基丁酸酯中的應(yīng)用。

技術(shù)方案：為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：一種嗜冷孟氏假單胞菌Pseudomonas?mandelii?CBS-1，保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏單位地址：湖北省武漢市武昌區(qū)武漢大學(xué)，郵政編碼為430072，其保藏編號(hào)為CCTCC?NO：M2013618，保藏日期為2013年11月28日。

本發(fā)明嗜冷孟氏假單胞菌Pseudomonas?mandelii?CBS-1的分離過(guò)程為：來(lái)自中國(guó)吉林省長(zhǎng)白山的土壤將菌源土壤懸浮在無(wú)菌水中，充分斡旋振蕩，置于富集培養(yǎng)基中20℃下培養(yǎng)2天；取等量50μL的培養(yǎng)液加到平板培養(yǎng)基上，20℃培養(yǎng)過(guò)夜。

結(jié)合嗜冷孟氏假單胞菌Pseudomonas?mandelii?CBS-1的菌落形態(tài)特征、生理和生化特征，將所測(cè)16SrDNA序列通過(guò)BLAST比對(duì)，鑒定其為嗜冷孟氏假單胞菌(Pseudomonas?mandelii)。嗜冷孟氏假單胞菌Pseudomonas?mandelii?CBS-1的16SrDNA序列如SEQ?ID?No.1所示。

本發(fā)明還提供了上述嗜冷孟氏假單胞菌Pseudomonas?mandelii?CBS-1在制備聚羥基丁酸酯中的應(yīng)用。

所述應(yīng)用，具體為：將嗜冷孟氏假單胞菌Pseudomonas?mandelii?CBS-1接種于基本培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，分離，即得聚羥基丁酸酯。

所述基本培養(yǎng)基包括1%蔗糖作為碳源、谷氨酸鈉作為氮源、1.0g/L?KH₂PO₄、2.5g/LNa₂HPO₄、0-2g/L?NaCl，pH為7.0-8.0，優(yōu)選7.0-7.5，C/N比在5以上，優(yōu)選5-30。

其中，培養(yǎng)溫度為15-30℃，優(yōu)選20-25℃，培養(yǎng)時(shí)間為48-72h。

有益效果：本發(fā)明提供了一種嗜冷孟氏假單胞菌，能積累聚羥基丁酸酯，在48小時(shí)內(nèi)有氧生長(zhǎng)到細(xì)胞干重達(dá)29.3g/L，合成PHB量達(dá)22.3g/L，PHB產(chǎn)率高，大大降低了工業(yè)生產(chǎn)PHB的成本。