[發明專利]一種檢測柯薩奇病毒A6、A10型的熒光定量試劑盒

有效

• 申請號: 201410012004.1
• 申請日: 2014-01-12
• 公開（公告）號: CN103789451A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 陳瑜;李蘭娟;謝國良;崔大偉
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

1.?一種檢測柯薩奇病毒A6、A10型的熒光定量試劑盒，其特征在于，由定量RT-PCR反應液、酶混合液、引物探針混合液、CVA6標準品、CVA10標準品、CVA6強陽性對照品、CVA10強陽性對照品、CVA6弱陽性對照品、CVA10弱陽性對照品、陰性對照品組成；其中定量RT-PCR反應液有PCR反應緩沖液、氯化鎂和三磷酸脫氧核糖核苷酸混合物，酶混合液含耐熱Taq?DNA聚合酶、RNA酶抑制劑和MMLV逆轉錄酶，引物探針混合液包含CVA6、CVA10兩組特異性引物和相應的CVA6、CVA10兩種熒光標記的特異性探針，陰性對照為高溫高壓滅菌的焦碳酸二乙酯處理水，CVA6、CVA10強陽性對照品和CVA6、CVA10弱陽性對照品為包含CVA6、CVA10的保守區基因序列的陽性質粒樣品；

特異性引物及特異性探針序列如下：

上游引物CVA6-F:?5’-?AARCCRGATAGYAGGAAATC-3’，

下游引物CVA6-R：5’-?GGGGTGGATCACTCAATTTTG-3’，

特異性探針CVA6-P:?5’-FAM-?CAATGGCAGACTGCYACYAAYCCGTCG-BHQ1-3’，

上游引物CVA10-F:?5’-?GAGACTGGACGYGTRCCA-3’，

下游引物CVA10-R:?5’-?GGGTYTCAATCATGTTYTCATCTG-3’，

特異性探針CVA10-P:?5’-HEX-?CAGAGACRGGTGCCACWTCTAAYGCC-BHQ1-3’。

2.?一種檢測柯薩奇病毒A6、A10型的熒光定量試劑盒，其特征在于，CVA6、CVA10的特異性探針分別采用FAM、HEX兩種熒光標記。

3.?一種檢測柯薩奇病毒A6、A10型的熒光定量試劑盒，其特征在于，CVA6、CVA10標準品的保守區基因序列如下：

CVA6標準品序列為：

GTATGTACCACCAGGGGCCCCTAAACCGGATAGTAGGAAATCATACCAATGGCAGACTGCTACTAACCCGTCGGTATTCGCAAAATTGAGTGATCCACCCCCCCAGGTGTCTGTCCCGTTCAT，

CVA10標準品序列為：

CCACTCCCAGTTCACACCGATTAGAGACTGGACGCGTGCCAGCGCTACAGGCTGCAGAGACGGGTGCCACTTCTAATGCCACAGATGAGAACATGATTGAAACCCGTTGTGTGGTTAACAGAA。

4.?一種檢測柯薩奇病毒A6、A10型的熒光定量試劑盒，其特征在于，引物探針混合液保存在棕色管。

5.?一種檢測柯薩奇病毒A6、A10型的熒光定量試劑盒，其特征在于，所述試劑盒需于-20℃儲存，盡量減少反復凍融。