[發明專利]納米氧化銅增強熒光測定乳酸的方法

有效

• 申請號: 201410011997.0
• 申請日: 2014-01-10
• 公開（公告）號: CN103712969A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 陳偉;胡愛玲;彭花萍;鄧豪華;林小青
• 申請（專利權）人: 福建醫科大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

1.一種納米氧化銅為催化劑測定乳酸的熒光分析方法，其特征是首先將乳酸、乳酸氧化酶和磷酸鹽緩沖液三者混合溫浴進行乳酸氧化酶酶促反應，然后向其中加入磷酸鹽緩沖液、對苯二甲酸和納米氧化銅繼續溫浴進行熒光反應，用熒光分光光度計測定上述混合液反應產物的熒光強度。

2.根據權利要求1所述的納米氧化銅為催化劑測定乳酸的熒光分析方法，其特征是熒光反應產物的最大激發波長和發射波長分別為315?nm和421?nm。

3.根據權利要求1所述的納米氧化銅為催化劑測定乳酸的熒光分析方法，其特征是乳酸氧化酶酶促反應體系pH值為7.0，乳酸氧化酶濃度為0.035?U/mL。

4.根據權利要求1所述的納米氧化銅為催化劑測定乳酸的熒光分析方法，其特征是乳酸氧化酶酶促反應溫度為37?℃，反應時間為10分鐘。

5.根據權利要求1所述的納米氧化銅為催化劑測定乳酸的熒光分析方法，其特征是熒光反應體系的pH?值為7.0，納米氧化銅濃度為0.4?mg/L，對苯二甲酸濃度為3.0?mmol/L。

6.根據權利要求1所述的納米氧化銅為催化劑測定乳酸的熒光分析方法，其特征是熒光反應溫度為45?℃，反應時間為120分鐘。

7.一種利用納米氧化銅為催化劑測定乳酸的熒光分析方法，其特征是在EP管中分別加入50?μL濃度為0.35?U/mL的乳酸氧化酶、50?μL濃度為200?mmol/L?、pH?7.0的磷酸鹽緩沖溶液和0.4?mL不同濃度的乳酸溶液而形成不同乳酸濃度的混合液，將上述不同乳酸濃度的混合液分別置于37?℃溫浴，10分鐘后向其中加入3.65?mL?濃度為200?mmol/L、pH?7.0的磷酸鹽緩沖液，0.8?mL濃度為18.75?mmol/L的對苯二甲酸和50?μL濃度為40?mg/L的納米氧化銅，45℃溫浴，120分鐘后分別測定其在421?nm處的熒光強度，激發波長為315?nm，以熒光強度對乳酸濃度作圖得到標準曲線以用于測定乳酸。

8.根據權利要求1或2或3或4或5或6或7所述的熒光分析方法，其特征是所述的納米氧化銅由如下步驟制得：1）取0.02?mol/L的醋酸銅溶液150?ml和0.5?ml冰醋酸加入到裝有冷凝管的三頸瓶中，攪拌加熱至沸騰；2）快速加入0.04?g/ml的氫氧化鈉溶液10?ml,加完后繼續攪拌5分鐘，得到褐色氧化銅沉淀；3）將反應得到的黑色氧化銅沉淀離心，用無水乙醇洗滌三次，減壓干燥，即得納米氧化銅粉體。

9.一種利用納米氧化銅為催化劑測定血清乳酸含量的熒光分析方法，其特征是它由以下步驟組成：（1）在EP管中分別加入稀釋后的血清、乳酸氧化酶和磷酸鹽緩沖液混合溫?。唬?）向上述EP管中加入磷酸鹽緩沖液，對苯二甲酸和納米氧化銅繼續溫?。唬?）將反應產物置于熒光分光光度計中檢測熒光強度，根據乳酸標準曲線測定血清中乳酸濃度。

10.根據權利要求9所述的利用納米氧化銅為催化劑測定血清乳酸含量的熒光分析方法，其特征是在EP管中分別加入50?μL濃度為0.35?U/mL的乳酸氧化酶、50?μL濃度為200?mmol/L、pH?7.0的磷酸鹽緩沖溶液和0.4?mL稀釋40倍的血清樣品而形成混合液，將上述混合液置于37?℃溫浴，10分鐘后向其中加入3.65?mL?濃度為200?mmol/L、pH?7.0的磷酸鹽緩沖液，0.8?mL濃度為18.75?mmol/L的對苯二甲酸和50?μL濃度為40?mg/L的納米氧化銅，45℃溫浴，120分鐘后測定其在421?nm處的熒光強度，激發波長為315?nm；所述的納米氧化銅由如下步驟制得：1）取0.02?mol/L的醋酸銅溶液150?ml和0.5?ml冰醋酸加入到裝有冷凝管的三頸瓶中，攪拌加熱至沸騰；2）快速加入0.04?g/ml的氫氧化鈉溶液10?ml,加完后繼續攪拌5分鐘，得到褐色氧化銅沉淀；3）將反應得到的黑色氧化銅沉淀離心，用無水乙醇洗滌三次，減壓干燥，即得納米氧化銅粉體。