[發(fā)明專利]一種海洋微生物小分子代謝產(chǎn)物餾分制備的前處理工藝

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410011435.6
• 申請(qǐng)日: 2014-01-10
• 公開（公告）號(hào): CN103772086A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許晨;許建中;夏金梅;廖云莉;王偉毅;林翌;陳建明;邵宗澤;單大鵬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 國(guó)家海洋局第三海洋研究所;中國(guó)大洋礦產(chǎn)資源研究開發(fā)協(xié)會(huì)
• 主分類號(hào): C07B63/00
• 分類號(hào): C07B63/00;B01J20/281
• 代理公司: 廈門原創(chuàng)專利事務(wù)所 35101
• 代理人: 陳建華

1.一種海洋微生物小分子代謝產(chǎn)物餾分制備的前處理工藝，包括以下步驟：

1）用物理方法直接對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行細(xì)胞破壁處理，依不同的菌種種類調(diào)節(jié)破壁壓力；

2）破壁處理后的發(fā)酵液用管式離心機(jī)進(jìn)行固液分離；或是破壁處理后的發(fā)酵液按比例添加入硫酸鋁溶液，一定溫度下先快速攪拌而后慢速攪拌，對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行絮凝；

3）采用碟片式膜過濾器過濾經(jīng)離心固液分離的發(fā)酵液或是經(jīng)硫酸鋁絮凝的發(fā)酵液；

4）濾過的發(fā)酵液用大孔樹脂層析柱吸附富集小分子代謝產(chǎn)物；

5）待濾過液過完柱后，用純凈水過柱，洗去殘留于層析柱中的鹽、色素、殘余蛋白和糖等雜質(zhì)；

6）用含水有機(jī)溶劑洗脫吸附于大孔樹脂載體上的小分子代謝產(chǎn)物；

7）洗脫液經(jīng)濃縮后即為可用于小分子代謝產(chǎn)物色譜制備的浸膏。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種海洋微生物小分子代謝產(chǎn)物餾分制備的前處理工藝，其特征是：步驟1）所述的細(xì)胞破壁處理是采用均質(zhì)機(jī)細(xì)胞破碎法，不同的菌種中，海洋細(xì)菌細(xì)胞破壁壓力大于600?bar，最好大于700bar，海洋放線菌細(xì)胞破壁壓力大于1000?bar，最好大于1200bar。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種海洋微生物小分子代謝產(chǎn)物餾分制備的前處理工藝，其特征是：步驟2）中所述的硫酸鋁水溶液濃度為5～20%，最好是5~10%，控制添加比例使硫酸鋁的終含量在50～500ppm，最好是100~300ppm；所述的攪拌方式為手動(dòng)攪拌或機(jī)械攪拌，所述的快速攪拌為大于100轉(zhuǎn)/分，所述的慢速攪拌為小于50轉(zhuǎn)/分；所述的絮凝，其溫度為25~45℃。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種海洋微生物小分子代謝產(chǎn)物餾分制備的前處理工藝，其特征是：步驟3）中所述采用碟片式膜過濾器，其截留分子量為5000~12000，最好是8000~10000；所述的離心固液分離是連續(xù)流離心分離，其轉(zhuǎn)速12000~20000轉(zhuǎn)/分，最好是15000~20000轉(zhuǎn)/分。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種海洋微生物小分子代謝產(chǎn)物餾分制備的前處理工藝，其特征是：步驟4）中所述的大孔樹脂層析柱為低壓層析柱，大孔樹脂載體為苯乙烯系大孔樹脂、丙烯酸系大孔樹脂、以及它們的官能團(tuán)改性大孔樹脂；所述的層析柱采用單柱或串聯(lián)雙柱模式，最好是不同性質(zhì)載體的串聯(lián)雙柱模式。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種海洋微生物小分子代謝產(chǎn)物餾分制備的前處理工藝，其特征是：步驟5）中所述的純凈水為蒸餾水、去離子水、反滲透水、超純水；所述純凈水過柱的體積為2~10倍柱床體積，最好是2~5倍柱床體積。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種海洋微生物小分子代謝產(chǎn)物餾分制備的前處理工藝，其特征是：步驟6）中所述的含水有機(jī)溶劑為甲醇水溶液、乙醇水溶液、丙酮水溶液或其中的兩種到三種的組合；含水有機(jī)溶劑濃度為5~100%；所述的洗脫方式是分級(jí)等度洗脫和梯度洗脫；所述分級(jí)等度洗脫是20%、40%、60%、80%、100%含水有機(jī)溶劑依次洗脫，最好是20%、50%、100%三個(gè)濃度等級(jí)等度洗脫，洗脫體積為層析柱床的1~10倍，最好是2~5倍；所述的梯度洗脫是5%~100%的含水有機(jī)溶劑連續(xù)梯度洗脫，洗脫體積為層析柱床的1倍至8倍，最好是2~4倍。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種海洋微生物小分子代謝產(chǎn)物餾分制備的前處理工藝，其特征是：步驟7）中所述的洗脫液經(jīng)濃縮為低溫減壓濃縮，蒸發(fā)溫度為25~100℃，最佳蒸發(fā)溫度為35～45℃，真空度為：5～95kPa，最佳真空度為5～25?kPa，冷凝溫度為1～20?℃，最佳冷凝溫度為5～10?℃；所述的洗脫液的濃縮裝置為真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮儀或刮膜式真空濃縮儀或真空濃縮儀。