[發(fā)明專利]一種檢測孔雀石綠的核酸適配體電化學(xué)生物傳感器的制備方法及應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410008020.3
• 申請日: 2014-01-08
• 公開（公告）號: CN103713026A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王虹智;黃加棟;于京華;劉素;崔敏;李杰;徐偉;郭玉娜
• 申請（專利權(quán)）人: 濟南大學(xué)
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于納米材料和食品中有毒有害物質(zhì)的檢測領(lǐng)域，提供了一種檢測孔雀石綠的電化學(xué)生物傳感器，可以用于漁業(yè)生產(chǎn)中孔雀石綠的檢測。

背景技術(shù)

孔雀石綠（Malachite?Green，MG）化學(xué)名為四甲基代二氨基三苯甲烷，又名堿性綠、孔雀綠或者中國綠，屬三苯甲烷類染料，孔雀石綠在水生動物體內(nèi)會很快代謝成無色孔雀石綠?？兹甘G及其代謝產(chǎn)物無色孔雀石綠成為重大的食品安全隱患。目前，孔雀石綠被我國被列為禁用漁藥，因此，我們應(yīng)當(dāng)建立一種簡單、快速、靈敏的檢測孔雀石綠的方法。當(dāng)前無色孔雀石綠的檢測方法主要有薄層色譜法（TLC）、分光光度法、高效液相色譜法（HPLC）等。這些方法有操作繁瑣、儀器價格昂貴，需要專業(yè)的技術(shù)人員，而且不適合現(xiàn)場大規(guī)模的檢測等缺點。

本研究實現(xiàn)了一種利用核酸適配體電化學(xué)生物傳感器檢測魚類食品中的孔雀石綠的方法，具有靈敏度高，分析速度快，操作簡單以及成本低廉的特性。通過在玻碳電極表面修飾可以增強電化學(xué)信號的復(fù)合物，然后在修飾電極的表面綁定能與孔雀石綠特異性識別的適配體，構(gòu)建了檢測孔雀石綠的電化學(xué)生物傳感器。由于適配體及抗體均是不導(dǎo)電的物質(zhì)，被固定在電極表面之后會阻礙電子的傳輸，從而導(dǎo)致傳感器電化學(xué)信號的變化，利用電化學(xué)信號的變化可以達到對待檢測物進行檢測的目的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的內(nèi)容之一是提供了一種檢測食品中孔雀石綠（MG）的核酸適配體電化學(xué)生物傳感器的制備方法。

本發(fā)明的內(nèi)容之二是將所制備的核酸適配體電化學(xué)生物傳感器用于檢測魚類食品中的孔雀石綠（MG）。

本發(fā)明的技術(shù)方案，包括以下步驟：

1、一種檢測魚類食品中孔雀石綠（MG）的核酸適配體電化學(xué)生物傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）石墨烯殼-聚糖復(fù)合物（GR-CS）的制備：

將0.02g的氧化石墨烯（GO）分散到20ml超純水中，超聲分散8h，加入0.5ml的PSS和足量的水合肼，90℃攪拌一天，將得到的黑色分散液用水沖洗n次后，干燥得到石墨烯（GR）。將制得的石墨烯溶于殼聚糖中，得到1mg/ml的石墨烯-殼聚糖復(fù)合物。

（2）納米金（AuNPs）的制備：

將100ml，0.01%的HAuCl₄煮沸，然后將2ml，1%的檸檬酸鈉快速添加到回流的HAuCl₄溶液中，當(dāng)顏色由淡黃變?yōu)樯罴t時，及得到所要制備的納米金。

（3）核酸適配體溶液的配制：

用超純水，?0.1%的DEPC一起處理過夜，第二天滅菌去除DEPC來配置DEPC水溶液。然后將核酸適配體溶入到配置的DEPC溶液中，值得均一的溶液備用。

（4）檢測孔雀石綠（MG）的核酸適配體電化學(xué)生物傳感器的制備方法，步驟如下：

取10ul的GR-CS均一溶液修飾在玻碳電極表面，室溫過夜晾干；然后滴加10ul的AuNPs，室溫晾干；然后通過金氨鍵將核酸適配體固定在電極表面，室溫晾干。

2、如上述制備的一種檢測孔雀石綠（MG）的核酸適配體電化學(xué)生物傳感器，用于MG的檢測步驟如下：

1）以Ag/AgCl為參比電極，以Pt為對電極，核酸適配體電化學(xué)生物傳感器為工作電極，連接到電化學(xué)工作站，在鐵氰化鉀溶液中，掃描電位為0.5V，檢測目標(biāo)物質(zhì)綁定前后的電信號變化孔雀石綠（MG）濃度的關(guān)系，繪制工作曲線；

2）將待測樣品溶液代替孔雀石綠（MG）標(biāo)準溶液，按照工作曲線的繪制方法進行檢測。

上述制備的檢測孔雀石綠（MG）的核酸適配體電化學(xué)生物傳感器，所用的原材料均在化學(xué)試劑公司購買。

本發(fā)明體現(xiàn)的優(yōu)勢和特點是：

?（1）本發(fā)明采用的GR-CS-?AuNPs復(fù)合物導(dǎo)電性強，成為構(gòu)建電化學(xué)傳感器的優(yōu)良材料；

（2）本發(fā)明制備的傳感器靈敏度高，檢測速度快，只需幾分鐘就可以完成一個基本的檢測過程；

（3）本發(fā)明檢測孔雀石綠（MG）的方法，操作簡單、快速、靈敏，便于現(xiàn)場檢測。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外，還應(yīng)理解，在閱讀本發(fā)明所講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明做各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。

實施例1

一種檢測孔雀石綠（MG）的核酸適配體電化學(xué)生物傳感器的制備方法，步驟如下：