[發明專利]PLDα1基因在增加作物抗旱性及種子產量中的應用

有效

• 申請號: 201410007616.1
• 申請日: 2014-01-08
• 公開（公告）號: CN103773784A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 魯少平;王學敏;洪月云
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N15/84;A01H5/00;A01H4/00
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 徐紹新

1.PLDα1基因在增加作物抗旱性及種子產量中的應用，其中，所述PLDα1基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，或者與SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列相似性大于或等于70%。

2.一種增加作物抗旱性及種子產量的方法，其特征在于：將在氣孔保衛細胞中特異性表達的啟動子AtKat1_pro調控下的PLDα1基因，通過轉基因手段將其整合到作物基因組中，所述在氣孔保衛細胞中特異表達的啟動子AtKat1_pro，其基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示。

3.一種增加油菜抗旱性及種子產量的方法，其特征在于包括以下步驟：

1）種子的滅菌及萌發：將油菜種子滅菌消毒后播種到M₀培養基中，25℃下暗光培養5天得幼苗；

2）農桿菌的培養：挑取含有從模式植物擬南芥中克隆的PLDα1基因質粒的農桿菌單菌落，將農桿菌單菌落放到含50mg/L卡那霉素的LB液體培養基中培養1-2天，離心，倒掉上清，用等體積的DM溶液重懸菌體并將菌液稀釋10倍；

3）外植體的制備和侵染：切取步驟1）的幼苗的下胚軸，將其在步驟2）配制好的菌液中侵染30min，使切口充分和菌液接觸；

4）愈傷組織的培養：將侵染后的外植體轉到已滅菌的吸水紙上，待殘留的菌液吸干后將外植體轉到M₁培養基中，25℃下暗光培養2天；然后轉移到M₂培養基中，在25℃下光照培養3周；再轉移到M₃培養基中，以后每2-3周繼代一次，直至長出綠芽；將綠芽切下并轉入到M₄培養基中，生根2-4周，得轉基因油菜幼苗并將其移栽到大田，

其中，各培養基和DM溶液的配方及PH值如下：

M₀培養基：2.2g/L?MS粉末，10g/L瓊脂粉，pH值為5.8-6.0；

M₁培養基：4.4g/L?MS粉末，30g/L蔗糖，18g/L甘露醇，1mg/L2,4-二氯苯氧乙酸，0.3mg/L激動素，100μM乙酰丁香酮，6g/L瓊脂糖，pH值為5.8；

M₂培養基：4.4g/L?MS粉末，30g/L蔗糖，18g/L甘露醇，1mg/L2,4-二氯苯氧乙酸，0.3mg/L激動素，30μM硫代硫酸銀，300mg/L羧芐青霉素，25mg/L卡那霉素，6g/L瓊脂糖，pH值為5.8；

M₃培養基：4.4g/L?MS粉末，10g/L葡萄糖，0.25g/L木糖，0.6g/L2-（N-嗎啉代）乙磺酸，2mg/L玉米素，0.1mg/L吲哚乙酸，300mg/L羧芐青霉素，25mg/L卡那霉素，6g/L瓊脂糖，pH值為5.8；

M₄培養基：4.4g/L?MS粉末，10g/L蔗糖，300mg/L羧芐青霉素，9g/L瓊脂粉，pH值為5.8；DM溶液：4.4g/L?MS粉末，30g/L蔗糖，100μM乙酰丁香酮，pH值為5.8。