[發明專利]早期結直腸腺癌miRNAs特異表達譜及診斷模型

有效

• 申請號: 201410007417.0
• 申請日: 2014-01-07
• 公開（公告）號: CN103667516A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 王傳新;鄭桂喜;張欣
• 申請（專利權）人: 山東大學齊魯醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 彭成

技術領域

本發明涉及早期結直腸腺癌miRNAs特異表達譜，以及其逆轉錄引物和檢測引物，以及診斷模型，屬于醫學診斷技術領域。

背景技術

結直腸腺癌是消化系統最常見的惡性腫瘤之一，其發病率和死亡率呈逐年上升的趨勢。結直腸腺癌患者的預后取決于其診斷時所處的疾病階段，據統計，無侵襲轉移的結直腸腺患者的5年生存率可高達90%，有局部轉移者的5年生存率約68%，而遠處轉移者的5年生存率則僅約11%。因此早期發現結直腸腺癌是改善患者預后、降低死亡率的關鍵。

目前用于結直腸腺癌的診斷方法主要包括：CT和MRI、電子腸鏡和血清CEA。CT和MRI等對于小于1cm的病灶無法早期診斷，不能用于結直腸腺癌的早期診斷；電子腸鏡檢查雖被推薦為診斷結直腸腺癌最可靠的方法，但卻是有創檢查，一定程度上增加了病人的痛苦，且價格昂貴，限制了其在大規模篩查中的應用；腫瘤標志物以其簡便、經濟、非侵入性等特點日益受到關注。但是，目前臨床上推薦用于結直腸腺癌診斷和預后判斷的腫瘤標志物只有CEA，而CEA作為腫瘤標志物其敏感性和特異性在結直腸腺癌診斷中的應用也備受質疑。目前的結直腸腺癌腫瘤標志物遠遠不能滿足臨床需求，因此，尋找敏感性特異性更高的用于早期診斷結直腸腺癌的腫瘤標志物是臨床亟待解決的難題。

MicroRNA(miRNAs)是一類分布廣泛的非編碼蛋白質的單鏈小分子RNAs，其通過對mRNA降解或抑制其翻譯，在轉錄后對靶基因的表達水平進行調節，從而參與細胞分化、生長、凋亡、代謝等功能。研究表明，機體內組織、器官的代謝異?；蚱髻|性病變可能導致特定疾病狀態下某些循環miRNAs表達水平的升高或降低。近年來發現血清中存在大量豐富且穩定的miRNAs，通過對腫瘤患者血清中miRNAs表達譜與對照組進行對比分析，發現不同腫瘤中具有特定的表達譜，為腫瘤的無創性早期診斷提供了一條新的途徑。因此，確定結直腸腺癌miRNAs表達譜，篩選差異表達的miRNAs，建立血清miRNAs診斷模型，有助于實現對結直腸腺癌的早期診斷。

發明內容

針對上述現有技術，本發明提供了早期結直腸腺癌的miRNAs特異表達譜，以及其逆轉錄引物和檢測引物、檢測試劑盒，以及診斷模型。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種早期結直腸腺癌miRNAs特異表達譜，由上調表達的miR-19a-3p，miR-92a-3p，miR-223-3p，以及下調表達的miR-422a構成。

所述miRNAs來自外周靜脈血的血清。

所述早期結直腸腺癌miRNAs特異表達譜中特異表達miRNAs的逆轉錄引物和檢測引物，如下：

（1）miR-19a-3p的逆轉錄引物和前向檢測引物：逆轉錄引物的序列如SEQ?ID?NO：1所示，前向檢測引物的序列如SEQ?ID?NO：2所示：

SEQ?ID?NO：1：

5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGTCAGTTTT-3’；

SEQ?ID?NO：2：5’-ACACTCCAGCTGGGTGTGCAAATCTATGCAA-3’；

（2）miR-92a-3p的逆轉錄引物和前向檢測引物：逆轉錄引物的序列如SEQ?ID?NO：3所示，前向檢測引物的序列如SEQ?ID?NO：4所示：

SEQ?ID?NO：3：

5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGACAGGCCG-3’；

SEQ?ID?NO：4：5’-ACACTCCAGCTGGGTATTGCACTTGTCCCG-3’；

（3）miR-223-3p的逆轉錄引物和前向檢測引物：逆轉錄引物的序列如SEQ?ID?NO：5所示，前向檢測引物的序列如SEQ?ID?NO：6所示：

SEQ?ID?NO：5：

5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGTGGGGTAT-3’；

SEQ?ID?NO：6：5’-ACACTCCAGCTGGGTGTCAGTTTGTCAAAT-3’；

（4）miR-422a的逆轉錄引物和前向檢測引物：逆轉錄引物的序列如SEQ?ID?NO：7所示，前向檢測引物的序列如SEQ?ID?NO：8所示：

SEQ?ID?NO：7：