[發明專利]一種多花黑麥草組培快繁方法

有效

• 申請號: 201410005547.0
• 申請日: 2014-01-07
• 公開（公告）號: CN103749298A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 王曉凌;施江;李曉倩;趙威
• 申請（專利權）人: 河南科技大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120
• 代理人: 羅民健

技術領域

本發明屬于植物生物學領域，具體涉及一種多花黑麥草組培快繁方法。

背景技術

多花黑麥草是重要的禾本科牧草,近年來,成為我國大力推廣的牧草以及草坪草種類,在我國畜牧業發展和城鄉美化中的作用越來越大。黑麥草分蘗多,?產量高,?質地柔軟,?綠期長,?是良好的綠色飼料。另外,?其根系發達,?適生性強,?耐踐踏,?有耐鹽堿潛力,?能增加土壤有機質,?改善土壤結構,?防止水土流失,?是很好的草坪草。為適應黑麥草育種工作的需要,?保存和快速繁殖優質原始材料,?以及為有關黑麥草基因表達的生理生態研究適時提供可靠的研究材料，黑麥草的離體培養和快速繁殖技術受到越來越多的重視。目前有關黑麥草的組織培養僅限于種子誘導愈傷和植株再生，以及用原生質體、幼穗、莖尖等作外植體誘導愈傷組織或叢生芽的形成，但誘導時間長、增殖速度慢、成苗周期長，組培快繁技術還不成熟。

發明內容

本發明針對上述問題的不足，提供一種多花黑麥草組培快繁方法，其培養方法簡便易行，培養周期短。

本發明為解決上述問題所采用的技術方案是：一種多花黑麥草組培快繁方法，包括無菌實生苗的制備、無根系無菌分蘗叢生芽的制備、有根系無菌實生苗的制備和移栽；

所述無根系無菌分蘗叢生芽的制備方法為：在超凈工作臺內，選取健壯的無菌實生苗，并將其置于無菌培養皿中，在無菌條件下先剪去無菌實生苗的根系，然后在根莖結合處向上1cm的位置切割，得到莖基，將得到的莖基放于組培瓶內的生芽培養基表面，然后輕壓，使根部沒入生芽培養基中，然后蓋緊組培瓶蓋子；再將組培瓶置于溫度為23～27℃，光照時間為16h/d，光強為1500~2000Lx的光照培養箱中培養20~35天后，單個莖基萌發出高6~10cm，數量為8~20個的分蘗叢生芽，得分蘗叢生芽，然后從中選取數量為18~48個的分蘗叢生芽作為無根系無菌分蘗叢生芽；

所述有根系無菌實生苗的制備方法為：在超凈工作臺內，取出制得的無根系無菌分蘗叢生芽，并置于無菌培養皿中，用滅菌過的醫用手術刀切除叢生芽上部的多余葉片，留下長2~3cm的叢生芽，然后在分蘗節處縱向切割，將其分割成完整的單芽，然后將單芽根部向下輕放于組培瓶內的生根培養基表面，輕壓使其根部沒入培養基中，接種完后蓋緊瓶蓋，將接種后的組培瓶置于溫度為23～27℃，光照時間為16h/d，光照強度為1500~2000Lx的光照培養箱中培養15~25天后，幼苗基部長出6~10根須根，得無菌實生苗。

所述無菌實生苗的制備方法為選取完整成熟的黑麥草種子，放入自來水中浸泡0.5~1h，然后在超凈工作臺內，將黑麥草種子轉移至無菌瓶內，先用體積百分比分數為75%的酒精將黑麥草種子消毒30~60s，再用無菌水沖洗2~3遍，之后放入質量百分比濃度為0.1%的升汞中浸泡消毒6~8min，用無菌水沖洗4~6遍后，得到無菌種子，在超凈工作臺內，將得到的無菌種子放入無菌培養皿中，在無菌條件下輕放于無菌基本培養基表面，然后輕壓，使種子沒入培養基中，接種完后蓋緊組培瓶蓋子，將組培瓶置于溫度為23～27℃，光照時間為16h/d，光照強度為1000~2000Lx的光照培養箱中，培養20~35天后，得到高度為5~8cm的無菌實生苗。

所述移栽的方法為將蛭石和草炭土按3:1的重量比混合，得混合基質，攪拌均勻后，備用；

從培養基中取出制備的的有根系的無菌實生苗，用清水洗掉根部殘余的培養基，并置于混合基質中，使根系完全沒入混合基質中，在溫度為23～27℃，光照時間為16h/d，光照強度為1500~2000Lx的光照培養箱中培養7天后，再置于溫度為23～27℃的玻璃溫室中，在自然光照下培養6～7天后，即可成苗。

所述無菌基本培養基的配制方法，包括以下步驟：

步驟一：母液的配置：