[發(fā)明專利]一種協(xié)同抑癌的前列腺癌藥物組合物

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410003979.8
• 申請日: 2014-01-03
• 公開（公告）號: CN103877098A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李曉萌;劉舒;許瑩
• 申請（專利權(quán)）人: 東北師范大學(xué)
• 主分類號: A61K31/5685
• 分類號: A61K31/5685;A61P35/00;A61K31/352
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明公開了黃酮(Flavone)與雙氫睪酮(DHT)在治療前列腺癌中的協(xié)同作用，即當(dāng)存在體內(nèi)正常濃度的雙氫睪酮時，黃酮才能正常發(fā)揮抑癌作用，抑制前列腺癌增殖，并促進(jìn)前列腺癌凋亡。本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

前列腺癌是嚴(yán)重威脅全世界男性健康的惡性腫瘤，為老年人疾病，研究表明環(huán)境和飲食因素是影響前列腺癌發(fā)生發(fā)展的重要因素。在亞洲國家，其發(fā)病率和死亡率明顯低于西方國家。相比西方國家，亞洲飲食中更多黃酮類物質(zhì)的攝入引起了世界研究者的廣泛關(guān)注。

黃酮是類黃酮類植物雌激素的一種，關(guān)于黃酮對癌癥的作用學(xué)術(shù)界有兩種看法：有報道表明黃酮對包括前列腺癌在內(nèi)的多種腫瘤具有顯著的預(yù)防作用，但也有報道顯示黃酮對包括前列腺癌在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞增殖呈現(xiàn)促進(jìn)作用。

值得一提的是，前列腺癌是一種增齡性疾病，發(fā)病率隨著年齡增長而逐漸升高，而且前列腺癌是一種潛伏癌，80歲以上人群中可達(dá)40%，可能是由于年齡增加，體內(nèi)雙氫睪酮水平下降導(dǎo)致，但雙氫睪酮與前列腺癌相關(guān)性及其分子機(jī)制尚不明確。前列腺癌早期治療采用摘除睪丸并給以雄激素拮抗劑的去勢治療，但是多數(shù)術(shù)后前列腺癌患者會病情復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)的原因和分子機(jī)制尚不明確，提示了雄激素可能的抗癌作用。

我們的研究發(fā)現(xiàn)黃酮與雙氫睪酮在治療前列腺癌中起協(xié)同作用，共同存在時發(fā)揮抑制前列腺癌的保護(hù)作用；且只有存在正常濃度的雙氫睪酮時，黃酮才能正常發(fā)揮對前列腺癌的抑癌作用，二者缺一不可。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明公開了黃酮(Flavone)與雙氫睪酮(DHT)在治療前列腺癌中的協(xié)同作用，即當(dāng)存在體內(nèi)正常濃度的雙氫睪酮時，黃酮才能正常發(fā)揮抑癌作用，抑制前列腺癌增殖，并促進(jìn)前列腺癌凋亡。

首先，以細(xì)胞周期重要調(diào)控基因p21^WAF1/Cip1啟動子的轉(zhuǎn)錄活性為檢測指標(biāo)，我們發(fā)現(xiàn)黃酮和雙氫睪酮具有激活p21^WAF1/Cip1轉(zhuǎn)錄的協(xié)同作用。進(jìn)一步，我們發(fā)現(xiàn)過表達(dá)ERβ放大這種協(xié)同效應(yīng)，而ERα或AR沒有明顯作用。通過基因ERβ過表達(dá)和基因沉默實(shí)驗(yàn)，我們證明黃酮和雙氫睪酮協(xié)同活p21^WAF1/Cip1轉(zhuǎn)錄效應(yīng)是通過ERβ的分子靶點(diǎn)實(shí)現(xiàn)的。蛋白質(zhì)表達(dá)檢測表明，過表達(dá)ERβ顯著上調(diào)了p21^WAF1/Cip1的表達(dá)，而基因敲除ERβ則逆轉(zhuǎn)了這個作用。以上結(jié)果證明了黃酮和雙氫睪酮激活p21^WAF1/Cip1啟動子是通過ERβ實(shí)現(xiàn)的。

通過MTT試驗(yàn)，證明黃酮和雙氫睪酮協(xié)同抑制了前列腺癌DU145細(xì)胞的增殖，而且這種抑制作用可以被ERβ過表達(dá)所增強(qiáng)，被ERβ-shRNA所逆轉(zhuǎn)。采用碘化丙叮檢測細(xì)胞周期證明了黃酮和雙氫睪酮協(xié)同時，細(xì)胞出現(xiàn)亞G1期細(xì)胞凋亡峰，細(xì)胞凋亡可以被ERβ過表達(dá)所增強(qiáng)，被ERβ-shRNA所逆轉(zhuǎn)。同時黃酮與雙氫睪酮的共刺激抑制了細(xì)胞增殖指標(biāo)BcL2、PCNA的蛋白表達(dá)，促進(jìn)了細(xì)胞凋亡指標(biāo)Caspase3活化型的發(fā)生，這種作用可被ERβ-shRNA所逆轉(zhuǎn)。以上結(jié)果證明黃酮與雙氫睪酮激活ERβ后顯著抑制細(xì)胞增殖，并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

本發(fā)明提供了一種治療前列腺癌的新型手段和分子機(jī)制，即黃酮與雙氫睪酮通過協(xié)同效應(yīng)激活ERβ，上調(diào)細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)基因p21^WAF1/Cip1，實(shí)現(xiàn)前列腺癌中的治療作用。

具體實(shí)施方式：

p21^WAF1/Cip1是一種細(xì)胞周期蛋白（CyciinS）依賴激酶（CDKS）的抑制蛋白（CKI），是調(diào)控細(xì)胞周期的基因。當(dāng)DNA損傷和細(xì)胞衰老時，p53增多并誘導(dǎo)p21^WAF1/Cip1轉(zhuǎn)錄，p21^WAF1/Cip1與相應(yīng)的CDK-Cyclin復(fù)合物結(jié)合，抑制其蛋白激酶的激活，阻滯細(xì)胞周期的運(yùn)行。目前p21^WAF1/Cip1的激活已經(jīng)成為抗腫瘤藥物發(fā)現(xiàn)的重要分子靶點(diǎn)。