[發明專利]一種棘孢木霉菌厚垣孢子粉劑及其制備方法與它的用途

有效

• 申請號: 201410003169.2
• 申請日: 2014-01-03
• 公開（公告）號: CN103740634A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 曾希柏;蔣細良;蘇世鳴;王秀榮;李蓮芳;白玲玉;王亞男;段然;吳翠霞
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農業環境與可持續發展研究所;中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N3/00
• 分類號: C12N3/00;B09C1/10;C12R1/885
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 劉秀娟

【技術領域】

本發明屬于微生物技術領域。更具體地，本發明涉及一種棘孢木霉菌厚垣孢子粉劑，還涉及所述棘孢木霉菌厚垣孢子粉劑的制備方法，還涉及所述棘孢木霉菌厚垣孢子粉劑的用途。

【背景技術】

木霉菌(Trichoderma?spp.)是一類土壤中普遍存在的腐生真菌，其生長快、生物量大。木霉菌在其生長周期內可以產生三種繁殖體，包括菌絲體、厚垣孢子和分生孢子，目前生產實際中常用的木霉菌劑多為它的活分生孢子制劑，如以色列開發的哈茨木霉T39可濕性粉劑Trichodex，美國的Topshield(哈茨木霉T22)等。一些木霉菌常常可形成圓形或橢圓形的厚垣孢子，在基內菌絲上間生，或者在營養菌絲側枝的尖端端生，其大小在7～12×10^-13μm，表面光滑，細胞壁有加厚現象，無性生殖產生，通常有耐不良環境條件的能力。厚垣孢子是木霉菌重要的繁殖體形式。木霉屬厚垣孢子在土壤中存活能力要優于分生孢子，至少能存活20月。

在木霉菌的眾多種類中，棘孢木霉（Trichoderma?asperellum）具有富集與轉化砷功能、能忍耐高砷環境且生長良好。如Zeng等(Capability?of?Pentavalent?Arsenic?Bioaccumulation?and?Biovolatilization?of?Three?Fungal?Strains?under?Laboratory?Conditions，Clean-Soil?Air?Water，2010，38(3),238-241)報道的結果表明，棘孢木霉菌對環境中砷具有很高的耐受性，并且可將環境中砷累積于細胞內，同時將砷轉化為易揮發的形態從而釋放到大氣中，進而減少環境中砷的含量。因此，棘孢木霉菌可被用于砷污染環境的修復中。此外，木霉菌的生防能力也被大家廣泛認同。

目前，許多研究者就對木霉的產孢條件進行了大量的摸索，以期高效地將該類木霉菌應用于生產實踐中。從木霉菌分生孢子的產生條件來看，其在多種固體或液體培養基中都能夠產生分生孢子，而且城市垃圾、腐敗的咖啡果皮、禽類的糞便以及混以牛糞的咖啡果皮、香蕉葉、甘蔗渣和麥麩等廉價物質均可作為木霉菌的固體培養基來生產分生孢子，且孢子產量都可達10⁹CFU/克左右。由此來看，木霉菌產生分生孢子的生產條件相對要求較低。

近年來，國內外研究發現T.harzianum,T.viride等木霉菌株在糖蜜－玉米漿等液體培養基中進行深層發酵15天左右可產生10⁷數量級的厚垣孢子；在麥麩等、滅菌土壤、土壤浸出液及植物碎片等固體培養基中培養20天左右也可產生厚垣孢子達10⁶數量級。總體來看，目前報道的各木霉菌厚垣孢子的發酵時間均較長（>15天），且成本較高，發酵的產率較低，并且發酵后生成的部分厚垣孢子的活性或作用能力可能會降低或喪失。目前，國內外尚未見到具有富集與轉化砷功能棘孢木霉菌厚垣孢子粉劑制備的相關報道。所生產出的厚垣孢子如果以液態形式施用，不僅運輸不方便、而且也易使菌劑受到污染；而厚垣孢子經制備成固態粉劑后，不僅運輸方便、菌劑受污染的幾率大大減少，而且還利于儲存、方便應用等，同時對提高菌株的活性和應用效果等具有良好作用。

【發明內容】

[要解決的技術問題]

本發明的目的是提供一種棘孢木霉菌厚垣孢子粉劑。

本發明的另一個目的是提供所述棘孢木霉菌厚垣孢子粉劑的制備方法。

本發明的另一個目的是提供所述棘孢木霉菌厚垣孢子粉劑的用途。

[技術方案]

本發明是通過下述技術方案實現的。

本發明涉及一種棘孢木霉菌厚垣孢子粉劑的制備方法。

本發明使用的棘孢木霉菌（Trichoderma?asperellum）已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保存，保存編號為CGMCC?No.3186，保存日期為2009年7月09日，具體參見申請日2012年09月26日、申請號201210361866.6、發明名稱“一種棘孢木霉菌的篩選方法及其應用”的發明專利申請。

該制備方法的步驟如下：

A、耐砷活性保持培養