[發明專利]一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201410001028.7
• 申請日: 2014-01-02
• 公開（公告）號: CN103713123A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 唐俊;譚彩蓮;覃波強
• 申請（專利權）人: 中山市粵爾生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/544
• 分類號: G01N33/544;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，其特征在于，它含有：

(1)包被硝基咪唑抗原的酶聯板或包被硝基咪唑特異性抗體的酶聯板；

(2)酶標記硝基咪唑特異性抗體或酶標記硝基咪唑抗原；

(3)硝基咪唑標準品溶液；

(4)底物顯色液；

(5)終止液；

(6)濃縮洗滌液；

(7)濃縮復溶液。

2.根據權利要求1所述的一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，其特征在于，包被硝基咪唑抗原的酶聯板或包被硝基咪唑特異性抗體的酶聯板的制備步驟為：

(1)用包被緩沖液將硝基咪唑半抗原與載體蛋白偶聯物或抗抗體以0.02~0.08μg/ml濃度稀釋成抗原稀釋液或抗體稀釋液；

(2)向酶聯板的每孔中加入100μl已經稀釋好的抗原稀釋液或抗抗體稀釋液，37℃溫育2h，傾去包被液，用洗滌液洗滌4次，每次15~30s，拍干；

?(3)向酶聯板的每孔中加入150~200μl封閉液，37℃溫育1~2h，傾去孔內液體，干燥后用鋁膜真空密封保存。

3.根據權利要求2所述的一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，其特征在于，所述緩沖液為pH值9.6、濃度為0.05mol/L、含有0.5%甲醇的碳酸鹽緩沖液；所述的洗滌液為含有8%~15%吐溫-20的去離子水或超純水；所述的封閉液是含有8%~15%的脫脂奶和1%惰性蛋白的溶液；該載體蛋白可為牛血清白蛋白、雞卵清蛋白、兔血清蛋白、人血清白蛋白、人血纖維蛋白、血藍蛋白等大分子載體。

4.根據權利要求1所述的一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，其特征在于，所述的硝基咪唑酶標記抗原為采用戊二醛法將標記酶與硝基咪唑半抗原進行偶聯得到。

5.根據權利要求1所述的一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，其特征在于，所述的硝基咪唑特異性抗體為單克隆抗體或多克隆抗體。

6.根據權利要求5所述的一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，其特征在于，所述單克隆抗體制備的步驟為：

（1）動物免疫程序：采用Balb/c小鼠作為免疫動物，免疫原(硝基咪唑半抗原與鑰孔槭血藍蛋白的偶聯物)免疫劑量為80~100μg/只，首免時將免疫原與等量的弗氏完全佐劑混合制成乳化劑，頸背部皮下多點注射，間隔2~3周取相同劑量免疫原加等量弗氏不完全佐劑混合乳化，加強免疫一次，四免后腹腔加強免疫一次，3天后取脾細胞；

（2）細胞融合與克隆化：取免疫Balb/c小鼠脾細胞，按5~10：1比例與SP2/0骨髓瘤細胞融合，采用間接競爭ELISA測定細胞上清液，篩選陽性孔，利用有限稀釋法對陽性孔進行克隆化，直到得到穩定分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株；

（3）細胞凍存和復蘇：取處于對數生長期的雜交瘤細胞用凍存液制成l~5×106個/ml的細胞懸液，分裝于凍存管，在液氮中長期保存，復蘇時取出凍存管，立即放入37℃水浴中速融，離心去除凍存液后，移入培養瓶內培養；

（4）單克隆抗體的制備與純化：采用體內誘生法，將Balb/c小鼠(8周齡)腹腔注入滅菌石蠟油0.5ml/只，7~14天后腹腔注射雜交瘤細胞5×l05~106個/只，7~10天后采集腹水，用辛酸-飽和硫酸銨法進行腹水純化，小瓶分裝，-20℃保存；

（5）抗體凍干粉可將腹水在37℃環境下烘干，放入-20℃保存；

（6）抗體工作液是用抗體稀釋液將抗體以0.02~0.08μg/ml濃度進行稀釋。

7.根據權利要求5所述的一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，其特征在于，所述多克隆抗體制備的步驟為：采用新西蘭大白兔作為免疫動物，免疫原(硝基咪唑半抗原與鑰孔槭血藍蛋白的偶聯物)免疫劑量為1mg/kg，首免時將免疫原與等量的弗氏完全佐劑混合制成乳化劑，頸背部皮下多點注射，間隔3~4周取相同劑量免疫原加等量弗氏不完全佐劑混合乳化，加強免疫一次，共免疫5次，最后一次不加佐劑；最后一次免疫7~l0天后采血，測定血清抗體效價，心臟采血，經硫酸銨分級沉淀得到純化的多克隆抗體。

8.根據權利要求1所述的一種硝基咪唑類藥物快速檢測試劑盒，其特征在于，當標記酶為過氧化物酶時底物顯色液為過氧化氫或過氧化脲與四甲基聯苯胺硫酸鹽混合溶液、終止液為0.1~0.5mol/L的硫酸或鹽酸緩沖液；當標記酶為半乳糖甘酶時，底物顯色液為0.5mol/L磷酸鉀緩沖液，終止液為2mol/L的檸檬酸緩沖液。