[發(fā)明專利]逆轉(zhuǎn)紫杉醇耐藥性的化合物組合物的制備方法與藥物用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410000104.2
• 申請(qǐng)日: 2014-01-02
• 公開（公告）號(hào): CN104758279A
• 公開（公告）日: 2015-07-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁敬鈺;吳斐華;張雪芹;王孟華;王立英;周志紅;盧海英;付菊琴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)藥科大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K31/352
• 分類號(hào): A61K31/352;A61K31/357;A61P35/00;A61K31/337
• 代理公司: 暫無信息
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一、技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及二萜類化合物紫杉醇、冬凌草甲素和冬凌草乙素的制備方法，并涉及冬凌草甲素／紫杉醇組合物(冬凌草甲素組合物)以及冬凌草乙素／紫杉醇組合物(冬凌草乙素組合物)具有逆轉(zhuǎn)紫杉醇耐藥性和增加紫杉醇化療敏感性的作用，可用于紫杉醇耐藥的肺癌等癌癥的治療。

二、背景技術(shù)

惡性腫瘤嚴(yán)重威脅人類生命及生活質(zhì)量，其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)。肺癌是全球發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一，己成為目前人類因腫瘤死亡的主要原因，隨著環(huán)境污染的日益嚴(yán)重，其發(fā)病率在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)將呈顯著的上升趨勢(shì)。我國(guó)是肺癌的高發(fā)國(guó)家，在致人死亡的惡性腫瘤中，肺癌位居首位。

化療在腫瘤的治療中發(fā)揮著重要作用。紫杉醇(Taxol)是Wani等于1971年從美國(guó)西部短葉紅豆杉中分離提取出來的一種天然抗腫瘤藥物，其主要通過與腫瘤細(xì)胞內(nèi)微管蛋白結(jié)合，破壞細(xì)胞有絲分裂期微管的正常功能，誘導(dǎo)細(xì)胞阻滯于G₂／M期，從而殺傷腫瘤細(xì)胞。紫杉醇療效確切，抗瘤譜廣，目前己成為臨床上治療卵巢癌、乳腺癌、肺癌、頭頸部癌、前列腺癌和胃癌的一線用藥。然而，耐藥問題的出現(xiàn)是臨床治療失敗的主要原因，成為制約紫杉醇發(fā)展的一大瓶頸。

紫杉醇耐藥現(xiàn)象的產(chǎn)生機(jī)制為：P-gp過度表達(dá)或功能亢進(jìn)；促調(diào)亡因子基因及蛋白表達(dá)減低，或抗凋亡因子基因及蛋白表達(dá)升高，使腫瘤多藥耐藥細(xì)胞抵抗和逃逸抗腫瘤藥物誘導(dǎo)的凋亡；微管蛋白亞型表達(dá)的改變或其與藥物結(jié)合位點(diǎn)的基因突變，導(dǎo)致微管聚合臨界濃度的提高或微管與藥物結(jié)合受阻；細(xì)胞周期改變及腫瘤微環(huán)境改變等等。所以，利用體外耐藥細(xì)胞系，尋找具有逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥作用的化合物，顯得尤其重要。中醫(yī)藥作為腫瘤綜合治療的重要組成部分，以其安全、有效、副作用小等特點(diǎn)在預(yù)防和阻斷腫瘤的發(fā)生發(fā)展中，有重要的療效和獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。

冬凌草(碎米椏Rabdosia?rubescens(Hemsl.)Hara.)是一種唇形科香茶菜屬植物，產(chǎn)于我國(guó)湖北、四川、貴州、廣西、陜西、甘肅、山西、河南、河北、浙江、安徽等地。冬凌草抗腫瘤作用良好，毒性不明顯，被譽(yù)為“紫杉醇第二”，并被《中華人民共和國(guó)藥典》1977年版收載。冬凌草甲素(Oridonin，ORI)和冬凌草乙素(Ponicidin，PON)是冬凌草中貝殼杉烯類的二萜成分，是冬凌草中最重要的抗癌成分。己有文獻(xiàn)報(bào)道，ORI和PON可顯著抑制多種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，如抑制前列腺癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、白血病細(xì)胞、多形性惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖。冬凌草甲素體外抗腫瘤的機(jī)制與阻遏細(xì)胞周期、下調(diào)端粒酶活性、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等有關(guān)。

細(xì)胞凋亡是由基因控制的、高度有序的細(xì)胞主動(dòng)死亡過程，對(duì)維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和生長(zhǎng)發(fā)育有著極其重要的作用。研究證明，腫瘤的發(fā)生與細(xì)胞凋亡機(jī)制的紊亂密切相關(guān)，如果受損細(xì)胞的凋亡機(jī)制不能正常啟動(dòng)，機(jī)體內(nèi)細(xì)胞增殖與凋亡的平衡將被破壞，導(dǎo)致細(xì)胞過度增殖，就有可能引起腫瘤的產(chǎn)生。

由于冬凌草甲素和冬凌草乙素具有顯著的抗腫瘤作用，而紫杉醇在臨床使用中具有耐藥現(xiàn)象。為此，探討冬凌草甲素組合物(紫杉醇：冬凌草甲素=2∶1)和冬凌草乙素組合物(紫杉醇∶冬凌草乙素=2∶1)對(duì)肺癌細(xì)胞紫杉醇耐藥性的拮抗作用，這目前尚未見報(bào)道。

三、發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明包括了兩部分內(nèi)容，第一部分：紫杉醇、冬凌草甲素和冬凌草乙素的制備方法；第二部分：冬凌草甲素組合物以及冬凌草乙素組合物具有逆轉(zhuǎn)紫杉醇耐藥性和增加紫杉醇化療敏感性的作用，可用于紫杉醇耐藥的肺癌等癌癥的治療。

1、紫杉醇的制備方法

將新鮮的南方紅豆杉(Taxus?chinensis?var.mairei，人工栽培，三至五年生)粉碎成粗粉，用80％乙醇提取3次，合并提取液，過濾后減壓回收乙醇后，所得浸膏用氯仿萃取3次，合并萃取液，減壓回收有機(jī)溶劑，及減壓干燥得浸膏。上述浸膏用石油醚進(jìn)行固液萃取，余下的固形物溶適量氯仿中，經(jīng)氧化鋁柱層析去雜后，再用C_-18硅膠柱層析，用乙腈／水溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，含紫杉醇的洗脫液經(jīng)減壓濃縮至干得紫杉醇粗品；再分別用適量甲醇／水混合溶劑進(jìn)行兩次重結(jié)晶，經(jīng)真空干燥得紫杉醇。

其結(jié)構(gòu)如下圖所示：

2、冬凌草甲素和乙素的制備方法