[發明專利]一種用于抗腫瘤的siRNA及其應用

無效

• 申請號: 201410000101.9
• 申請日: 2014-01-02
• 公開（公告）號: CN103937792A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 周建平;王偉;王雅哲;丁楊;鮑秀麗
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種用于抗腫瘤的siRNA及其應用，尤其涉及靶向人Pokemon基因的siRNA及其抗腫瘤作用，屬于基因工程領域。

背景技術

RNA干擾(RNA?interference，RNAi)是由雙鏈RNA(double-stranded?RNA，dsRNA)啟動的序列特異的轉錄后基因沉默過程。在這一過程中，dsRNA被核酸內切酶切割成小干擾RNA(small?interfering?RNA，siRNA)，siRNA與相關蛋白質結合成RNA誘導沉默復合體(siRNA-induced?silencing?complex，RISC)，RISC識別并降解靶信使RNA(message?RNA，mRNA)，終止其參與的翻譯過程，從而抑制基因表達。RNAi技術具有高度特異性、作用迅速、起效快等特點，可以有效減少毒副作用發生的可能，現已被證實在多種病毒感染性疾病和腫瘤的治療中具有極大的潛力。

Pokemon基因，即POK紅系髓性致癌因子(POK?erythroid?myeloid?Ontogenic?factor)，也被稱為LRF、OCZF或FBI-1，是轉錄抑制因子POK家族的一員，也是被發現的第一個對抑癌基因，可變讀框基因(alterative?reading?frame，ARF)的特異性轉錄有抑制作用的因子，現已被確認為原癌基因。該基因主要通過調節ARF-p53路徑，特異性抑制腫瘤抑制蛋白ARF及其激動劑，使細胞的增殖調控失效，從而導致腫瘤發生(Maeda?T，Hobbs?RM，Pier?Paolo?Pandolfi.Cancer?Res，2005，65：8575-8578)。此外，Pokemon還位于多種腫瘤抑制基因和原癌基因的上游，在腫瘤轉化分子網絡機制中能控制其他癌基因的活性，并對腫瘤細胞的一些重要特性產生影響，被視為“腫瘤總開關”。例如，有研究表明，Pokemon為癌基因LAZ-3／BCL-6的潛在靶點，可與BCL-6協同作用促進淋巴瘤的發生發展；還可以反饋性增高人類腫瘤中廣泛表達的凋亡抑制基因BCL-2的表達(Davies?JM，Hawe?N，Kabarowski?J，et?al.Oocogene，1999，18(2)：365)。Pokemon基因的編碼產物，POK蛋白也可以介導蛋白二聚體形成，通過募集組蛋白脫乙酰基酶(HDACs)引起染色質結構改變，引起特定DNA基因的開關，從而行使轉錄抑制功能。

Pokemon基因在人類多發性腫瘤，如淋巴瘤、肝癌、乳腺癌、肺癌、結腸癌、前列腺癌和膀胱癌等中均有高度表達，而缺失此基因的細胞則不易發生惡性轉化。因此該基因有望成為腫瘤預防、診斷、治療和預后評價的新靶標，能夠特異性抑制Pokemon的藥物，極有可能成為一種強有力的抗癌劑。

發明內容

本發明要提供的是一種能特異性抑制人Pokemon基因表達的siRNA，通過如下技術方案實現：

根據siRNA靶序列基本原則，針對人Pokemon基因(NM_015898)設計了1條21個核苷酸的siRNA靶點序列，即si-Pokemon，包括正義鏈和反義鏈，其堿基序列如下：

正義鏈5’-AAGCACUUUAAGGACGAGGdTdT-3’(SEQ?ID?NO：1)；

反義鏈5’-CCUCGUCCUUAAAGUGCUUdTdT-3’(SEQ?ID?NO：2)。

根據本發明的優選實施例，所述干擾片段的3’端還添加了兩個呈單鏈懸掛結構的脫氧核糖核苷酸，以增強siRNA在體內和體外的穩定性，防止降解。

根據本發明的優選實施例，選擇目前較為常見的陽離子脂質體Lipofectamine2000作為轉染試劑。

根據體外實驗結果表明，本發明提供的siRNA能夠抑制多種腫瘤細胞中人Pokemon基因的表達，可應用于制備抗腫瘤基因藥物。優選實施例為人肝癌、乳腺癌和肺癌細胞。

本發明要提供的siRNA的應用，是指所提供的siRNA在制備對人Pokemon基因表達進行調節、調整或抑制的基因藥物，特別是治療人Pokemon基因過度表達所引起的疾病(如惡性腫瘤)的基因藥物中的應用。

上述基因藥物可通過靜脈或皮下給藥；所述藥物可通過局部給藥。

附圖說明

圖1為RT-QPCR檢測人肝癌細胞株HepG2各實驗組Pokemon基因的mRNA表達水平的結果圖。

圖2為RT-QPCR檢測人肺癌細胞株A549各實驗組Pokemon基因的mRNA表達水平的結果圖。