[發明專利]去除植物中遺傳連鎖的方法

有效

• 申請號: 201380073822.6
• 申請日: 2013-12-20
• 公開（公告）號: CN105025701B
• 公開（公告）日: 2018-09-25
• 發明（設計）人: P·本多克;J·斯圖爾曼
• 申請（專利權）人: 凱津公司
• 主分類號: A01H1/00
• 分類號: A01H1/00;A01H1/04;C12N9/22
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉

1.一種用于去除植物或植物細胞中第一染色體上所存在的第一基因座A和第二基因座B之間遺傳連鎖的方法，

所述方法包括：

（a）提供至少一個植物細胞，其包含所述第一染色體和至少第二染色體，其中所述第一染色體包含所述第一基因座A和所述第二基因座B，其中所述染色體是同源的或者是各自的部分同源染色體；

（b）在所述第一染色體中引入雙鏈斷裂，其中所述第一染色體中的雙鏈斷裂引入至所述第一基因座A和所述第二基因座B之間，從而提供包含所述第一基因座A的第一染色體的第一部分、以及包含所述第二基因座B的第一染色體的第二部分，

和

在所述第二染色體中在第二染色體對應的基因座或位置上引入雙鏈斷裂，從而提供第二染色體的第一部分和第二染色體的第二部分；

以及

（c）采用步驟（b）獲得的至少一個植物細胞，鑒定至少一個植物細胞，在其中第一染色體上的第一基因座A和第二基因座B之間的遺傳連鎖被去除；

其中，通過非同源末端連接，包含所述第一基因座A的第一染色體的第一部分被連接至第二染色體的第二部分，

并且，其中通過至少一種位點特異性核酸酶引入第一染色體中的雙鏈斷裂和第二染色體中的雙鏈斷裂，所述位點特異性核酸酶選自：鋅指核酸酶、大范圍核酸酶、TAL效應物核酸酶和CRISPR/Cas9系統的核酸酶。

2.根據權利要求1所述的方法，其中在步驟（c）中鑒定這樣的植物細胞，在其中第一染色體上的第一基因座A和第二基因座B之間的遺傳連鎖被去除，并且其中包含所述第一基因座A的第一染色體的第一部分被連接至第二染色體的第二部分，并且其中第一染色體的第二部分被連接至第二染色體的第一部分。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述第二染色體不包含和所述第一基因座A相同的基因座和/或不包含和所述第二基因座B相同的基因座。

4.根據權利要求1或2所述的方法，其中通過相同的位點特異性核酸酶、相同的鋅指核酸酶、相同的大范圍核酸酶、相同的TAL效應物核酸酶或相同的CRISPR/Cas9系統的核酸酶，引入第一染色體中的雙鏈斷裂和第二染色體中的雙鏈斷裂。

5.根據權利要求1或2所述的方法，其中第一染色體中引入不超過一個雙鏈斷裂，并且第二染色體中引入不超過一個雙鏈斷裂。

6.根據權利要求1或2所述的方法，其中

第一染色體包含所述第一基因座A和所述第二基因座B，其中所述第一基因座A和第一特征的期望性狀連鎖，以及所述第二基因座B和第一特征或第二特征的不期望性狀連鎖；以及

其中所述第二染色體不包含和所述第二基因座B相同的基因座，其中所述第二基因座B和所述第一特征或第二特征的不期望性狀連鎖。

7.根據權利要求6所述的方法，其中第一或第二特征的不期望性狀是選自如下的性狀：對第一特征的期望性狀有負面影響的性狀、降低產量的性狀、降低對疾病或害蟲抗性的性狀、降低生長的性狀、降低尺寸的性狀、降低種子的量的性狀、降低對脅迫耐受的性狀，所述脅迫包括鹽、熱、冷、水和干旱脅迫。

8.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述方法還包括

（d）從權利要求1步驟（b）或步驟（c）之后所獲得的植物細胞再生植物；

（e）通過自交或者和另一植物進行雜交，從所述再生植物中產生種子；以及

（f）從步驟（e）獲得的種子來培養植物。

9.根據權利要求8所述的方法，其還包括篩選步驟（f）獲得的所述植物是否去除遺傳連鎖。

10.根據權利要求1或2所述的方法，其中所提供的植物細胞是植物體細胞。

11.根據權利要求10所述的方法，其中植物體細胞是原生質體。

12.根據權利要求1或2所述的方法，其中植物細胞是獲自雜種的。