[發明專利]用于檢測毛癬菌屬與相關疾病的方法

在審

• 申請號: 201380073640.9
• 申請日: 2013-12-17
• 公開（公告）號: CN105008927A
• 公開（公告）日: 2015-10-28
• 發明（設計）人: A.若馬爾;B.默爾;O.魯瓦耶;G.拉費
• 申請（專利權）人: 蓋爾德馬研究及發展公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C07K16/14;C07K16/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 段家榮;石克虎

本發明涉及毛癬菌屬真菌（champignons?du?genre?Trichophyton）在人或動物體內、在皮膚及其附件上的存在的檢測。

本發明特別涉及檢測毛癬菌屬（Trichophytons）的方法，包括在皮膚或皮膚附件的樣品中確定選自五種特定蛋白酶的至少一種蛋白酶的存在的步驟。本發明還具體涉及針對這些蛋白酶的單克隆抗體以及含有它們的診斷試劑盒。

毛癬菌屬是在皮膚、頭皮或指甲上生長并在人或動物體內引起皮膚癬菌病的寄生性真菌。例如在人體內，毛癬菌屬可能導致在皮膚上的圓癬、在頭皮上的頭癬、在胡須區域上的膿癬或須癬以及在指甲上的甲癬。

這些疾病非常棘手，并可能導致其它嚴重的病理并發癥。它們的難看且有時致殘的外觀還可能對受影響的人產生顯著的負面心理影響。

目前存在治療毛癬菌屬在人或動物體內造成的疾病的治療手段，但是這些治療與進行的診斷的可靠性密切相關。

現在，皮膚或其附件的真菌疾病可能是由于除毛癬菌屬之外的真菌，如酵母、霉菌或其它皮膚癬菌，在這種情況下將需要不同的治療。此外，它們可能與皮膚或其附件的其它疾病或傷病混淆。例如，指甲的營養不良的臨床癥狀如牛皮癬、外傷、指甲腫瘤（ungual?tumor）、扁平苔癬和類似甲真菌疾病的細菌感染，并可能是混亂的來源。

因此至關重要的是能夠做出準確的診斷，因為不準確的結果導致啟動無效的治療方案。

現在有多種診斷工具，但是都不能令人滿意。特別是對于甲癬，已知六種不同的工具（Rothmund等人,?2012），其中兩種是常用的：直接觀察，其不確定性不可避免地導致診斷錯誤，以及培養病原體，這是長期和相當不切實際的過程，不能向每個人開放。還有NISSHO?CORPORATION公司制造的免疫試劑盒，其優點在于使用快速容易，但是缺乏靈敏性并尤其缺乏特異性。事實上，通過使用檢測存在于毛癬菌屬細胞壁上的多糖的抗體來檢測皮膚癬菌，但是也存在于許多其它皮膚癬菌上。

因此仍然需要快速、容易和特定地檢測皮膚或其附件上、特別是在指甲上毛癬菌屬的存在的解決方案，該解決方案克服了現有診斷工具的缺點。

這是本發明的目的，為了滿足這種需要，本發明提出了使用選自二肽基肽酶V（dipeptidyl-peptidase?V）、枯草桿菌樣蛋白酶6（subtilisin-like?protease?6）、枯草桿菌樣蛋白酶7（subtilisin-like?protease?7）、亮氨酸氨基肽酶1（leucine?aminopeptidase?1）和亮氨酸氨基肽酶2（leucine?aminopeptidase?2）的至少一種蛋白酶。

?本發明因此涉及選自二肽基肽酶V、枯草桿菌樣蛋白酶6、枯草桿菌樣蛋白酶7、亮氨酸氨基肽酶1和亮氨酸氨基肽酶2的至少一種蛋白酶用于檢測在人類或動物皮膚或皮膚附件的樣品中至少一種毛癬菌屬的存在的用途。

特別地，本發明涉及檢測至少一種毛癬菌屬的存在的方法，包括確定在獲自可能被毛癬菌屬感染的人類或動物的皮膚或皮膚附件樣品中存在選自二肽基肽酶V、枯草桿菌樣蛋白酶6、枯草桿菌樣蛋白酶7、亮氨酸氨基肽酶1和亮氨酸氨基肽酶2的至少一種蛋白酶的步驟。

受試和檢測的毛癬菌屬涉及皮膚和/或皮膚附件的疾病。

“附件”在本發明的含義中指的是含有高百分比角蛋白的任何保護性表皮附件、附器或覆蓋物，例如體毛、頭發和指甲。

有利地，在皮膚或其附件層次上存在這些蛋白酶的至少一種僅特定于毛癬菌屬的存在。作為易于使用、特定于毛癬菌屬的快速診斷工具的對象的該測定可以通過各種手段進行，由此能夠非常快速地啟動有效的、針對性的治療。兩種手段特別適合：通過質譜法和免疫檢測的測定。

為了實施第二種手段，根據特定目的，本發明還涉及針對二肽基肽酶V、枯草桿菌樣蛋白酶6或亮氨酸氨基肽酶2的單克隆抗體或能夠分別結合到二肽基肽酶V、枯草桿菌樣蛋白酶6或亮氨酸氨基肽酶2上的該抗體的片段，以及包含此類抗體的試劑盒。

圖1描述了二肽基肽酶V的定量限定。

現在將詳細描述本發明。

本發明因此涉及選自二肽基肽酶V、枯草桿菌樣蛋白酶6、枯草桿菌樣蛋白酶7、亮氨酸氨基肽酶1和亮氨酸氨基肽酶2的至少一種蛋白酶用于檢測涉及皮膚和/或皮膚附件霉菌病的人類或動物皮膚或皮膚附件樣品中至少一種毛癬菌屬的存在的用途。