[發明專利]用于生物合成生產的重組宿主細胞

有效

• 申請號: 201380073404.7
• 申請日: 2013-12-30
• 公開（公告）號: CN105283547B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: O.拉馬恩;V.索韋普蘭;R.龐德雅坦
• 申請（專利權）人: 羅地亞經營管理公司
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12P7/24;C12N15/52
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 周李軍;徐厚才

1.一種酵母細胞，該細胞包括編碼多酶復合體的異源多核苷酸，該多酶復合體參與苯丙烷類代謝途徑和香草素或其羥基苯甲醛前體的生物合成，該多酶復合體包括用于香豆酸的生物合成的酶，其中該多酶復合體進一步包括：a)巴豆酸酶，該巴豆酸酶是烯酰-輔酶A水合酶（ECH）；b)輔酶A連接酶，該輔酶A連接酶是4-香豆酸-輔酶A連接酶（4CL）；c) 3-單加氧酶，該3-單加氧酶是羥基苯甲酸羥化酶（HBH）或酚羥化酶（PheA）和黃素還原酶（FLARED）；和d)甲基轉移酶，該甲基轉移酶是O-甲基轉移酶。

2.根據權利要求1所述的酵母細胞，該多酶復合體包括

a) 苯丙氨酸氨解酶（PAL）、肉桂酸羥化酶（C4H）、細胞色素P450還原酶（CPR）、輔酶A連接酶、巴豆酸酶、3-單加氧酶和甲基轉移酶；

b) 酪氨酸氨解酶（TAL）、輔酶A連接酶、巴豆酸酶、3-單加氧酶和甲基轉移酶；或者

c) 苯丙氨酸/酪氨酸氨解酶（PAL/TAL）、肉桂酸羥化酶（C4H）、細胞色素P450還原酶（CPR）、輔酶A連接酶、巴豆酸酶、3-單加氧酶和甲基轉移酶。

3.根據權利要求1所述的酵母細胞，其中該多酶復合體包括

d) 甲基轉移酶，所述甲基轉移酶是咖啡酸O-甲基轉移酶（COMT）。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的酵母細胞，其中該巴豆酸酶是以下項中的任一項的烯酰-輔酶A水合酶（ECH）

a) 負責p-香豆酰輔酶A和/或阿魏酰輔酶A的鏈還原反應的ECH；

b) 將p-香豆酰輔酶A轉化為4-羥基苯甲醛的ECH；或者

c) 將阿魏酰輔酶A轉化為香草醛的ECH。

5.根據權利要求1至3中任一項所述的酵母細胞，該細胞進一步包括

a) 編碼羧基還原酶（CAR）的異源多核苷酸，任選地連同編碼磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶（PPTase）的多核苷酸；和/或

b) 編碼醇氧化酶的異源多核苷酸。

6.根據權利要求1至3中任一項所述的酵母細胞，其中該細胞是DNA修復缺陷型細胞或包括在DNA修復缺陷型細胞中拼接的多核苷酸簇的生產細胞。

7.根據權利要求1至3中任一項所述的酵母細胞，其中編碼一系列酶的多核苷酸由單個多順反子操縱子表達，或其中編碼一系列酶的多核苷酸由分離的啟動子表達。

8.根據權利要求1至3中任一項所述的酵母細胞，其中這些多核苷酸被穩定地整合至該細胞基因組中。

9.根據權利要求1至3中任一項所述的酵母細胞，其中這些多核苷酸源自至少兩種不同的物種。

10.根據權利要求1至3中任一項所述的酵母細胞，其中這些酶中的至少一個是嵌合酶。

11.根據權利要求10所述的酵母細胞，其中該嵌合酶是由不同多核苷酸的片段構成的核苷酸序列編碼的，這些片段被拼接成嵌合核苷酸序列。

12.根據權利要求1至3和11中任一項所述的酵母細胞，其中該香草素選自下組，該組由以下各項組成：香草醛、香草酸、乙基-香草醛、香草醇和香草醛-糖苷。

13.根據權利要求1至3和11中任一項所述的酵母細胞，其中該羥基苯甲醛前體選自下組，該組由以下各項組成：原兒茶醛、原兒茶酸、原兒茶醇、4-羥基苯甲醛、4-羥基苯甲酸、4-羥基芐醇、肉桂酸、香豆酸、咖啡酸和阿魏酸。

14.根據權利要求5所述的酵母細胞，其中所述醇氧化酶為香草醇氧化酶。