[發(fā)明專利]基因沉默

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201380073042.1
• 申請日: 2013-12-17
• 公開（公告）號: CN104994724A
• 公開（公告）日: 2015-10-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: N-H·蔡;Q·牛;S·鄧
• 申請（專利權(quán)）人: 洛克菲勒大學(xué)
• 主分類號: A01H5/10
• 分類號: A01H5/10;C07H21/04;C12N15/82
• 代理公司: 永新專利商標(biāo)代理有限公司 72002
• 代理人: 王健

1.分離的沉默增強子，其包含SEQ?ID?NO:6所示核苷酸序列。

2.權(quán)利要求1的分離的沉默增強子，其中所述沉默增強子在3’末端還包含1-1342個SEQ?ID?NO:1所示的連續(xù)核苷酸。

3.權(quán)利要求1的分離的沉默增強子，其中所述沉默增強子包含SEQ?ID?NO:5所示核苷酸序列。

4.權(quán)利要求1的分離的沉默增強子，其中所述沉默增強子包含SEQ?ID?NO:4所示核苷酸序列。

5.權(quán)利要求1的分離的沉默增強子，其中所述沉默增強子包含SEQ?ID?NO:3所示核苷酸序列。

6.權(quán)利要求1的分離的沉默增強子，其中所述沉默增強子包含SEQ?ID?NO:18所示核苷酸序列。

7.包含植物可操作啟動子的核酸構(gòu)建體，所述植物可操作啟動子與包含權(quán)利要求1-6任一項的沉默增強子的核酸分子可操作地連接。

8.權(quán)利要求7的核酸構(gòu)建體，其中所述植物可操作啟動子是異源植物可操縱啟動子。

9.權(quán)利要求7或8的核酸構(gòu)建體，還包含核酸沉默子分子，所述核酸沉默子分子與包含所述沉默增強子的核酸分子可操作地連接。

10.一種轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，其包含穩(wěn)定整合在其基因組中的權(quán)利要求9的核酸構(gòu)建體。

11.一種轉(zhuǎn)基因植物，其包含穩(wěn)定整合在其基因組中的權(quán)利要求9的核酸構(gòu)建體。

12.一種制備轉(zhuǎn)基因植物的方法，所述轉(zhuǎn)基因植物具有對感興趣的基因更有效的基因沉默，所述方法包括將權(quán)利要求9的核酸構(gòu)建體導(dǎo)入植物中，其中所述轉(zhuǎn)基因植物具有穩(wěn)定整合在其基因組中的所述核酸構(gòu)建體。

13.一種制備轉(zhuǎn)基因植物的方法，所述轉(zhuǎn)基因植物具有對感興趣的基因更有效的基因沉默，所述方法包括將權(quán)利要求9的核酸構(gòu)建體轉(zhuǎn)染進一或多個植物細(xì)胞中，并從轉(zhuǎn)染的一或多個植物細(xì)胞再生轉(zhuǎn)基因植物，其中所述轉(zhuǎn)基因植物具有穩(wěn)定整合在其基因組中的所述核酸構(gòu)建體。

14.一種增強植物細(xì)胞中植物基因的基因表達(dá)降低的方法，包括在適于核酸沉默子分子表達(dá)的條件下培養(yǎng)權(quán)利要求10的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，從而相對于不包含所述沉默增強子的相應(yīng)轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，植物基因的降低的表達(dá)被增強。

15.一種增強植物中植物基因的基因表達(dá)降低的方法，包括在適于核酸沉默子分子表達(dá)的條件下生長權(quán)利要求11的轉(zhuǎn)基因植物，從而相對于不包含所述沉默增強子的相應(yīng)轉(zhuǎn)基因植物，植物基因的降低的表達(dá)被增強。

16.一種增強植物細(xì)胞中植物基因的基因表達(dá)降低的方法，包括

用權(quán)利要求9的核酸構(gòu)建體轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞，以產(chǎn)生具有穩(wěn)定整合在其基因組中的核酸構(gòu)建體的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，及

在適于核酸沉默子分子表達(dá)的條件下培養(yǎng)所述轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，從而相對于不包含所述沉默增強子的相應(yīng)轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，植物基因的降低的表達(dá)被增強。

17.一種增強植物中植物基因的基因表達(dá)降低的方法，包括

用權(quán)利要求9的核酸構(gòu)建體轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞，以產(chǎn)生具有穩(wěn)定整合在其基因組中的核酸構(gòu)建體的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，

從轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞再生轉(zhuǎn)基因植物，其中轉(zhuǎn)基因植物具有穩(wěn)定整合在其基因組中的所述核酸構(gòu)建體，及

在適于核酸沉默子分子表達(dá)的條件下生長所述轉(zhuǎn)基因植物，從而相對于不包含所述沉默增強子的相應(yīng)轉(zhuǎn)基因植物，植物基因的降低的表達(dá)被增強。

18.一種鑒別可用于在植物中更有效地沉默感興趣的基因的推定的沉默增強子的方法，所述方法包括：

(a)用第一種核酸構(gòu)建體轉(zhuǎn)化第一種植物細(xì)胞，所述第一種核酸構(gòu)建體包含與核酸可操作地連接的植物可操作啟動子，所述核酸包含與核酸沉默子分子可操作地連接的推定的沉默增強子；

(b)用第二種核酸構(gòu)建體轉(zhuǎn)化第二種植物細(xì)胞，所述第二種核酸構(gòu)建體包含與核酸沉默子分子可操作地連接的植物可操作啟動子；

(c)確定第一種轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞及第二種轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞中的基因沉默水平；及

(d)如果第一種轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞比第二種轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞中的基因沉默水平高，則鑒別推定的沉默增強子是沉默增強子。